PDF《96T》

小鼠 小鼠 小鼠 小鼠钩端螺旋体 钩端螺旋体 钩端螺旋体 钩端螺旋体IgG(Lep IgG)酶联免疫 酶联免疫 酶联免疫 酶联免疫分析 分析 分析 分析试剂 试剂 试剂 试剂盒 盒盒盒使用说明书 使用说明书 使用说明书 使用说明书 本试剂盒仅供研究使用.

96T 使用目的 使用目的 使用目的 使用目的: : : : 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中钩端螺旋体 IgG(Lep IgG)表达. 实验原理 实验原理 实验原理 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠钩端螺旋体 IgG(Lep IgG)表达. 用纯化的抗原包 被微孔板,制成固相抗原,可与样品中钩端螺旋体 IgG(Lep IgG)相结合,经洗涤除去未结 合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过 彻底洗涤后加底物 TMB 显色.TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化 成最终的黄色.用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,与CUTOFF 值相比较,从 而判定标本中小鼠钩端螺旋体 IgG(Lep IgG)的存在与否. 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml*1 瓶7终止液 6ml*1 瓶2酶标试剂 6ml*1 瓶8阳性对照 0.5ml*1 瓶3酶标包被板

12 孔*8 条9阴性对照 0.5ml*1 瓶4样品稀释液 6ml*1 瓶10 说明书

1 份5显色剂 A 液6ml*1 瓶11 封板膜

2 张6显色剂 B 液6ml*1/瓶12 密封袋

1 个 标本 标本 标本 标本要求 要求 要求 要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含 NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性. 操作步骤 操作步骤 操作步骤 操作步骤 1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照

2 孔、阳性对照

2 孔、空白对照

1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50?l.然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40?l,然后再加待测样品 10?l.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不 触及孔壁,轻轻晃动混匀, 3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育

30 分钟. 4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水

30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置

30 秒后弃去,如此 重复

5 次,拍干. 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50?l,空白孔除外. 7. 温育:操作同 3. 8. 洗涤:操作同 5. 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50?l,再加入显色剂 B50?l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50?l,终止反应(此时蓝色立转黄色) . 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) . 测定应在加终止 液后

15 分钟以内进行. 操作程序总结 操作程序总结 操作程序总结 操作程序总结: : : : 计算和结果判定 计算和结果判定 计算和结果判定 计算和结果判定: : : : 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00;

阴性对照平均值≤0.10 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品 OD 值< 临界值(CUT OFF)者为钩端螺旋体 IgG(Lep IgG)阴性 阳性判定:样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为钩端螺旋体 IgG(Lep IgG)阳性 . 注意事项 注意事项 注意事项 注意事项 1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用. 2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存. 3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果. 4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染. 5.底物请避光保存. 6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm 7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.终止液为 2M 的硫酸,使用时必须 注意安全. 保存条件及有效期 保存条件及有效期 保存条件及有效期 保存条件及有效期 1.试剂盒保存: ;