PDF《真空渗透法转化油菜及转化种子的筛选》

植物学报c^价ese

8 『『ef『门o,Bo妇仃y 2009.

(2):21 6-222,帅呲chjnbuIlbotany.com doi:10.3∞9/j.issn.1674.3466.200睁.02.011 ・技术方法- 真空渗透法转化油菜及转化种子的筛选 王道杰.,杨翠玲,陆鸣 河南大学生命科学学院,河南省植物逆境生物学重点实验室,开封475004 摘要 真空渗透遗传转化法首先在拟南芥(A厂a6『dops『s ma『『a,,

a)中获得成功.是一种简便、快速且无需经过组织培养阶段 即可获得大量转化植株的基因转化方法.该研究以不同遗传背景的3个甘蓝型油菜(8厂ass,ca,7ap￡,s)品种(系)陕3B、L45和M923为材料,对真空渗透遗传转化方法中真空渗透时间和sIlwet L.77浓度与遗传转化效果的关系进行了比较,同时对转化 种子的筛选方法进行了优化.结果表明,卡那霉素(Km)对油菜种子的萌发影响不显著,但对其生长发育有明显的抑制作用. 不同油菜品种对卡那霉素的敏感性不同,各自的致死浓度也不一样.在0%一0.05%的浓度范围内,随着Silwet L一77浓度的增 加,在相同的真空渗透时间内,3个油菜品种的转化率逐渐升高.当sjlwet L一77浓度为0.05%时,10分钟的真空渗透时间可获 得最高转化效率,此时陕3B、L45和M923的转化率分别达到1.97%、2.09%和2.30%. 关键词 油菜,遗传转化.SI|wet L-77,真空渗透 壬道杰.杨翠玲,陆鸣(2009).真空渗透法转化油菜及转化种子的筛选.植物学报4.21 6―222. 油菜是重要的油料作物,对油菜的改良是育种专家 长期努力的目标.多年来,许多育种工作者试图采用传 统的育种手段来获得油菜良种,但进展十分缓慢.随着 基因工程技术的发展,人们越来越倾向于通过基因工程 的手段来改良油菜的产量、品质及抗逆性.因此,建 立良好的油菜转化体系至关重要. 目前的转基因技术可分为物理法、化学法及生物 学方法.而无论哪一种方法.都主要依靠转化细胞的脱 分化和再分化这一组织培养植株再生过程,实现外源基 因的转移,获得转基因植株(马建华和孙毅,2006).真 空渗透转化法作为原位转基因方法(,门p,anfa t阳nsformation)的一种,是由BechtoId等(1 993)将植物 病理学中用来辅助植物病毒进入植株的方法,应用到了 拟南芥似ra6『I如ps『s纳a『『ana)植株的农杆菌基因转化 上.该方法具有简便、快速、可靠等优点,为植物的 转基因工作开辟了新的途径(张庆祝和韩天富.2004). 在拟南芥上的实验表明,其转化效果受植株发育时期、 真空渗透时间和渗透剂浓度等多种因素的影响.此方 法在其它一些植物中也获得成功,例如L-u等(1 998)采用 该方法在北方小油菜(Brass『ca campesf厂,s ssp. 收稿日期:2008.04.1 0:接受日期:2008.08.29 基金项目:河南大学科技攻关项目(No.07YBGG01 2) +通讯作者.E―mail:[email protected] 曲『nens『s)中获得转化植株:Trieu等(2000)在豆科植物 百脉根(Med『ca90仉价caf 『a)上获得成功.de Ronde 等(2001)将萌发的大豆(G『yc加e max)种子与农杆菌共培 养一段时间后,抽真空,再将种子种于温室,长成植株后 收获种子检测转基因后代,也获得转化植株. 甘蓝型油菜(8rass如a,1apus)与拟南芥同属十字花 科,亲缘关系很近,可以期望将已经在拟南芥中获得成功 的,仃p『a,7招基因转化方法应用于油菜.本研究旨在探 索甘蓝型油菜高效的『仃p『an绍真空渗透遗传转化方法. 同时由于油菜的繁殖系数很高,本实验也试图通过对不 同方法的比较,探寻方便快捷的用于筛选价pfanfa法获 得的大量转化种子的方法,从而为该方法在油菜转基因 实践中的应用提供借鉴.