PDF《科学院 武缸病》

一第8卷第3期19cj3年e月 中国病毒学V【 R0LoGI CA N I CA 幸2(…8)V0

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3 S c .

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3 两株蓖麻蚕核型多角体病毒 D N A同源性的研究 '

严 银钫 - ― - ― ― ― - 一罗经(中国科学院武缸病毒研究所,武汉,430071),\8(f,・提要两株不同来源的蓖麻蚕核型多角体病 毒( A ~ N P V和A~NPV)经提纯后 . 使用 S D S 一 苯酚抽提病毒棱酸 , 并使用限制性内切酶 E c o R I , l l a r n } Ⅱ酶解后 . 用分子杂交方法与蚨 口平穆标记 的~-I)NA探针杂交 . 分析了两株蓖麻蚕 N P V病毒核酸的同谭性.B ∞ 酶解的 A . r N P V - D N A产生 8千片段 , 其中

5 十片段能与 a 曙NPvDNA探针杂交.B a m H l 酶解 D N A产生

7 个片段 , 其中6个 片段能 与A~scsNPV-DNA探制 杂交.结果表 明t两株 蓖麻 蚕NPV之 问病 毒核 酸具有很 高 的同源性 . 使 用斑点 杂交 方法分析 了Ar蟠NP v与ArNPV. 柞蚕 NP V及家 蚕NPV之 间的核酸 亡 的较 长期饲喂马桑 叶的蓖麻 蚕中分离 的一株核 型多角体病毒 .我 们曾对其 多角体 形态特征 、 病毒 粒子理化 特性进 行了研 究,并与蓖麻 蚕核 型多 角体病 毒(Philosaml a C y n t h i a R i c i n i ( At t a c u s r i c i n i ) Nu c l e a r P o l y h e d r o s i s V i r u s ) 进行了形态学和理 化特性 的比较 研究r . 为 了进一步研 究ArscsNPV与ArNP V之 间的关 系,本文使用分子 杂交方法 研 究了 A r s c s N P V与Ar N P V、 柞蚕 NP V、 家蚕NPVDNA之 问的核酸 同源性 .结果报道如下 . 材料和方 法l病毒Arsc~NPV由四川省林科院森保室提供. A r N P V: 由武投大学病毒系馈赠 . 家蚕NPV( ~ N P V) 、 柞蚕 N '

P V( A pN P v) : 由本 组保 存.各株多角体均按文漱 【

1 ] 方法提纯.

2 病毒按酸的提取 ;

接文漱 [

1 肪 法提取 I ) N A. 经紫外分光光度计检测其纯度和含量 . 并经

1 琼脂糖凝腔电泳证明无杂拔酸 存在后 备用 . 各限制性内切酶 H _ m d I・ E e o RI ・ a 町I H I 及XI~NA均贿自华美生物工程公司-限制性内切酶均带有

1 0 *缓冲液. 车文于

1 9

9 2 年l0月 6日收刊 .

1 9

9 3 年 2月

1 5日 修回. ・车课题 为国家自拣科学基盒资助项 目之一. . .现在地址 t 湖北医学院病毒研究所 . 武汉 .

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0 0

7 1 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病毒学第8卷 酶解 混合物

5 O 中包 含2lIsD NA,

1 5 ―

2 0单位内切酶

5 1

0 X酶 解缓 冲液 , 其余 用双蒸 水 补足 .

3 7 ℃酶解

2 小时.1琼脂糖 平板电泳 . '

块 口平移 制备 挥针 ;

. 按文献. 瑚 方法进行.3

0 l I l 反应混合物 中包含 N ~ - O N A

1 博, 亡d.jzp]dcTP(t00j)[购由福瑞公司 , 北京] l , DN A聚合 酶15单位 . D l '

4 a . ~ I l O O p g ,

1 0

0 ;

u n o l / I AA T P ,

4 GT P, d TI '

P,

3 .反 应物 于14℃水浴 巾保 温2―3小时,加入 E D T A 终止反 应后 , 于scpt】adcxG5 0(

2 I n l 体积 ) 柱层析 , 经B射线计 数器(Ⅵ) u M) 测定 C l s m 值.集中第一峰各管 . 加热通火后作探针 , 一2

0 ℃保存备用. s S o u t h e m 转移 和杂交 } 按文献咖方法操作 , 硝基纤维紊滤膜为 M a n d e l S c i e n t i f i c 公 司产 品,用于放射 自显影的 x光胶片为广东汕 头 感光化 学 厂产 品静i象变掘度为4

2 C

1 8 小时.换上杂交断 呻 针后再杂交2

4 小时.5

0 C 洗膜, 室沮手燥后与X光片一起 于一2 口 ℃放射 自显影