PDF《23!4》

3 J2 提取'

?: @5 A '

提取及<

$ A '

合成 采用

3 J2 L V F LC = V F多糖多酚植物总

3 J2 提 取试剂盒 B N 2J5

8 J# 提取橡胶树的胶乳

3 J2! 试 剂盒附带的 D J : . F 进行微量 D J2 的消化'

提取 的3J2 用#`琼脂糖凝胶电泳和 J : / ? D V ? L! B >

F V

9 ? ! Q

4 2# 仪器进行完整性和纯度的检测'

经检测的

3 J2 采用

3 F [ F V A

2 - W_ - V . A4 A V : / W@ D J2

4 U / A >

F . - .I - A B >

F V

9 ? ! Q

4 2# 进行@ D J2 第一链的 合成'

?: B1

2 3 ! 4基因

5 '

( %扩增和全长<

$ A '

扩增 根据橡胶树胶乳转录组数据库 >

A A L $ % % <

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+ Y ? [ % Y F ? % a = F V U % : @ @ + @ Y - / : @ @ b5

4 8 $

0 0

7 # + # 的注释信息! 获得 D

8 E E

2 蛋白的 Q / - Y F / F序列! 根 据该序 列设计3218引物 表## ! 采用4Z2

3 B ) F V BZ

3 2

1 8 @ D J2

29 L ;

- X - @ : A - ? / I - A

1 ;

? / A F @ >

! Q

4 2# 进行末端序列扩增'

以3218测序结果与Q/-YF/F序列拼接的全长@ D J2 序列设计引物 表##!采用!cC V -

9 F

4 B2

3 Z : SC V F

9 - S B : I :

3 : # 的 高保真聚合酶进行

3 B ) C

1 3 的验证'

C

1 3 程序为$

0 $ d预变性%9 - /&

0 *d变性% . ! ( d退火% . ! &

! d延伸%9 - /! 共% 个循环&

&

! d延伸#

9 - /'

+ 7`琼脂糖凝胶电泳分离 C

1 3 扩增产物! 天根胶 回收试剂盒纯化目的条带!连接至L

8 2

4 T ) G ;

= / A 表?本研究所用引物序列 B : K ;

F#C V -

9 F V . F a = F / @ F .= . F W - /A >

- .. A = W U 引物名称 C V -

9 F V/ :

9 F 引物序列 C V -

9 F V. F a = F / @ F $ e % e # $

32 1

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1 1 52BBB5B5

1 52B252552B $

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52 N ) J C

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1 21 2B555B552BB225

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1 %

32 1

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52 N ) C B

1 B252

1 1 55BB

1 21 B5225

1 BBB5 %

32 1

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52 N ) J C

25255 1 2B5252

1 BBB52

1 B 12BB55 _ E )

1 DJ2 )

52 N ) _

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1 B

1 BB

1 B

1 BB5BB

1 1 B

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1 DJ2 )

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3 2

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1 21 BB52BB

1 2

1 B521 BB5

1 P C

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52 N ) _

55 1 B5B

1 1

1 525B

122521 P C

1 3 )

52 N )

3 1

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1 52B21

1 1 2B

1 2

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5 P C

1 3 )

2 @ A - / ) _ 52BB

1 1 5BB5

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1 25225B

1 P C

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2 @ A - / )

3 1

2 1

12 1 B

1 25

12 1 22B5BB2

1 1

7 $ # ! 西北植物学报% $卷4-9L;

F1 ;

? / - / Y f F @ A ? V B V : / .

5 F /# 载体上! 送N/)[-AV?YF/公司进行测序'

?+ C生物信息学分析 利用J1GN网站^3__-/WFV软件 >

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F K+ F S L : . U + ? V Y % L V ? A . @ : ;

F % # 分析蛋白亲水性'

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F@ ? / . F V [ F WV F Y - ? / .: V F9 : V H F W<

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- / F . ( # ! 西北植物学报% $卷5324家族的典型结构域$ J 末端具有

52 信号感 知区的 D

8 E E

2 和BfMTJ C 酸 性结构 域!

1 末端 具有发挥阻遏作用的阻遏区域

3 f

8 3 和426! 以 及中心区 fMf N D* 核定位区域 J E 4! 起调节作用的 E R 亮氨酸重复序列# 和C?;

U4%B%f 丝氨酸%苏氨 酸%缬氨酸富集区# 区域 图!# '

此外! 通过 Z8

52 *+ 软件 构建的系统进化树显示! 橡胶树MK52 N 氨基酸序列与麻疯树O @