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1 C 蛋白氨基酸序列和 6D 3C 的同源性将其分为+个 家族) ! % * '

同时! 研究 人员还 对不同 植物 中的B1C蛋白也进行了分类! 其中模式植物拟南芥中共有( 个! # 基因! 被分为

0 组) ! $ * &

大豆基因组共有 % + 个! # 基因! 被分为5个亚族) $* ! 其中的 B

1 C $家 族有!个成员'

柠条锦鸡儿属豆科锦鸡儿属植物! 为欧亚大陆 特产! 在中国分布于内蒙古西部( 陕西北部以及宁夏 等地区) ! (* '

柠条锦鸡儿的枝叶繁茂( 产草量高( 营 养丰富( 适口性强! 是家畜的优良饲用灌木以及造林 和工业方面的重要材料) ! + * ! 对环境具有广泛的适应 性和抗逆性'

但是目前国内大部分学者都是对柠条 锦鸡儿的抗逆生理机制进行研究! 而很少有人研究 其分子机理'

因此! 研究柠条锦鸡儿抗逆分子机制 并进行其相关基因的克隆及表达分析越来越成为人 们研究该物种的重点) ! &

* '

本研究克隆了#个! #基因! 初步研究发现该基因受干旱( 盐和 C J C 强烈 诱导'

#材料和方法 9* 9植物材料及处理方法 柠条锦鸡儿种子采自于内蒙古赤峰市! 挑选饱 满无虫蛀的种子播种在装有蛭石和营养土 #^# # 的 培养钵中! 置于温室中进行培养! 培养条件分别是$ 温度! ( _! # +:光照% 5:黑暗! 光照强度&

5

8 ]'

选取#个月苗龄并且长势一致的柠条锦鸡儿小 苗用于 实验! 分 别进 行干 旱( C J C 和3728% 种处理'

处理方法分别是$ # # 小心从蛭石中取出柠条锦 鸡儿小苗! 清水冲洗掉小苗上的蛭石 尽量避免损伤 小苗# 后摆放于滤纸上! 进行干旱脱水处理&

! # 将柠 条锦鸡儿小苗根部浸泡于#

6 >

8 % B 的CJC水溶液中进行处理&

% # 将柠条锦鸡儿小苗浸泡于%

66 >

8 % B的3728溶液进行盐胁迫处理'

以上%种 处理的取样时间均为 ( * (( #( %( +( 0( # !和! $:! 每 个时间点取%株柠条锦鸡儿幼苗! 每种处理重复% 次'

采集 到的小苗地上部分样品于液氮中速冻! '

5 _冰箱保存用于 D 3C 提取'

94 :柠条锦鸡儿总 ;

<

/ 提取及反转录 采集柠条锦鸡儿小苗样品! 用4DT9>

8试剂 T / ) Y - X S >

;

@ /公司# 进行总 D 3C 提取! 按说明书操作进 行'

用超微量紫外分光光度计 K ( 检测 D 3C 浓度! #`浓度的琼脂糖凝胶电泳检测 D 3C 质量'

选 电泳条带清晰完整并且 a E ! + % ! % 值为#* 0!* 的D3C! 采用 D 3C I

2 DH - X

4 7 [

7 D 7公司# 进行= E ) 3C 第一链的合成! 以上操作按试剂盒说明书进行'

94 =1

2 3

4 ! $基因全长7 >

<

/ 的克隆 在已构建好的柠条锦鸡儿干旱胁迫抑制削减杂 交文库 V V M# ) ! &

* 中发现了#条! #基因片段! 通过32JTJ

8 7 . X比对! 发现该基因片段的( b 和% b 端均 不完整! 所以利用DC21技术扩增得到该基因的=E3C全长 '

( b ) D C

2 1和% b ) D C

2 1引物 表## 的设计以及具体实验操作流程完全按照试剂盒

4 7 [

7 D

7 表9实验中采用的引物及序列

4 7 F

8 @#I S -

6 @ S .? . @ A - /X : - .. X ? A <

引物类型 I S -

6 @ SX <

G @ 引物名称 I S -

6 @ S/

7 6 @ 序列 V @ \ ?........