PDF《细胞系使用说明书》

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518 号寅尚产业园 D 座210 室 细胞系使用说明书 细胞名称 MCF7/TAXOL 人乳腺癌细胞耐TAXOL株 货号 CQ80255 种属 人 细胞来源 ATCC/中科院/协和医院等地引进 生长特性 贴壁 上皮样 培养条件 培养基: 90% DMEM(H)+ 20% FBS +0.01mg/mL 重组人胰岛素 mcf7 耐药性是 500ng/mL taxol 温度:37℃ 气相:95%空气,5% CO2 传代 1. 用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒, 将其平躺置于培养箱中进行 1-3 小时的缓冲, . 然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入 5-6mL 新鲜 培养基(以T25 培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基 颜色变化对其进行换液以及传代,一般

2 到3天换一次液;

2.待细胞长至 80-90%时,需要对其进行传代,推荐传代比例为 1:3 至1:6;

3 传代步骤: 将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA 消化液置于 37° 预热, 倒掉培养瓶中的培 养基,往培养瓶中加入 3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去.往瓶中加 1-2 ml 预热好的胰 酶,置于 37° 孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细 胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便 于下次消化),消化好后加入 3ml 完全培养基终止消化.用移液枪轻轻吹打瓶壁上 的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm 离心 5min,弃上清,加入完 全培养基重悬细胞,进行传代. 保存 冻存条件:80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO (备注:建议使用本公司的冷冻液 (H-W-100) , 用4度保存的冷冻液直接重悬细胞, 不能预热后使用.) 保存条件:液氮存储 供应限制 仅供研究之用 常见问题及解决方案 1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老 师解决. 2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用 原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时 间最长不宜超过

72 小时) 3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱.1-2 小时后观察, 如细胞大部分又贴回瓶底, 表明细胞活力正常, 剩余漂浮的细胞可以去掉, 留8-10ml 培养液培养观察,细胞生长至汇合度 80%,进行消化传代;

如细胞还是不贴壁,将 细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我 们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决.

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