PDF《杨水云” 易全成》

1 .

4 吸 附菌 悬 液的 制备 首先将细菌液体培养至对数中期(

3 2 '

C 约8h~9 h ) , 测定菌液在

5 6

0 n m下的O D值, 并将所测数 据OD5.代人下式 =(

1 5 x0 ,

8 ) / O D 求取 值. 然后取 V m I 菌液离心取菌体, 分别用不同p H的D 液洗涤菌体 , 最后稀释到

1 5mL, 就得到了

1 m LOD为0.8的一系列不同 p H 的吸附菌液 经测定如此 制备的菌液每毫升菌液 中细菌 细胞的总数 达1O个,远比噬菌体浓度高 , 且 多重感染的几率很低 .

1 .

5 对 噬菌体 存活率影响 的测 定不同pH溶 液 中的处理 时 间取 f ― O和60r ai n两组 .

0 : 取上述噬菌体悬液数 等分, 分别加入不同 p H 的 D液 吹吸均匀 , 立即稀释于 p H

7 . 7的 D液 中,取部分稀释以双层琼脂平板法测定噬斑数, 剩余部分继续于 p H

7 . 7的 D液 中保留

3 0 r a i n 同法测 定 噬斑 数.可确 定灭 活作 用是 否 可逆 . f =6 0mi n: 依上法将噬菌体悬液稀释于不 同pH的D液中后 , 摇匀静置

6 0r ai n , 最后稀释于 p H

7 .

7 的 D液中, 同法测定比较噬斑数 , 可知处理 日寸}间的延长是否影响噬菌体的存活率 .

1 .

6 不同 p H 吸附菌液对噬菌体吸附效率黠响的测定 取不 同pH的吸附菌液

1 .

8 m L. 分别加几

0 .

2 m l 噬菌体悬液 , 混匀于

3 2 ℃下吸附

2 5 m i n , 然后分 别取不同 p H下 的细菌一噬菌体混合液

0 . 1mI , 以双层琼脂平板法测定噬斑数 , 记为 P , 比较不同 p H 下的 P 令最大的 只为只, 即只=( P ) … 剩余棍合液离心 , 取上清液各

0 .

1 mL, 双层琼脂平板法测 定来 吸附的噬菌 体数 尸,,

最后按 公式 F o =1 +P , / 只 求取 不同pH下的相 对吸附频 率.2结果与讨 论 曾有 人对 p H 灭活噬菌 体 的作 用做 过研pH的稀 释液体 进 行处 理后,以双层 琼脂 平板 表1不F Tab .1 S ur v i v a l 蜘.结果认为噬菌体存活的最适 p H 为7.本实验用不同 测定噬斑数结果 如表 l 及图1所示 . p H 下T的存 活情况ateofTP3 u nd e r D i f f e r e nt pH

5 6

7 7 .

5 7.

7 8

9 l O l l ①P: 不同p H溶液处理后双层平扳法测得的每糖升溶液中噬茁体的出斑数} ②F: 令噬菌体出斑数最大状态时的存 活率 为 1时求 得的相对存活率 f ③r- o ( 平衡 ) : 指在 同pH溶液 中作瞬时 处理后立 即置最适 p H 溶液 中静置平衡 从实验结果可知 : 酸性与高碱性条件对 P 均有灭活作用 , 但在相 同的处理 时间内 , 酸的灭活作用 比碱更强烈t 而且随着酸性程度的加强, 灭活作用也随之增大 在碱性介质中, 当p H超过8 .

5 ~9 . 这种 灭活作用就不再随p H的提高而增强了. 适宜T P 存活的p H范围很窄, 为p H

7 .

5 ~8 , 最适p H为7 .

7 左右 . 由f

0 ( 即处理时间趋于o ) 组结果可知, 酸、 碱的灭活作用是瞬间发生的, 不需要长时间的处理. 由fo(平衡) 组结果可以看到, 瞬时处理的噬例体在最适p H下平衡了一段时间, 但失活的噬菌体并未见 恢复活性, 可见这种灭活作用是一个不可逆的融程.由60min组结果可见, 随着处理时间的延长, 酸 碱灭 活效果 也提 高了.由于酸碱对T 的强烈灭活作用, 使其噼附效率测定中的变量复杂化, 所以本实验仅测定了p H ≥ 维普资讯 http://www.cqvip.com

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0 西北 大学学 报( 自然科学舨 ) 第28卷

9 范 围内的 吸 附效率 , 而且,在此范围 内碱 对噬 菌体 的灭 活 作用 相同.O00604025678910l1pH图1pH对 T 存活卓的影 响Fi g .