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2 MDM2 基因扩增检测试剂盒(荧光原位杂交法) 说明书 【产品名称】 通用名称:MDM2 基因扩增检测试剂盒(荧光原位杂交法) 英文名称:FISH detection Kit for the amplification of MDM2 gene 【包装规格】

10 人份/盒、20 人份/盒 【预期用途】 本产品用于检测福尔马林固定、石蜡包埋人脂肪肉瘤组织样 本中的MDM2基因扩增情况[1,2] .

【检验原理】 荧光原位杂交法(Fluorescent In Situ Hybridization,FISH)能 够使细胞中特定的核苷酸片段通过荧光而清楚的呈现,FISH 试验 过程中包含了双链 DNA 的解链,荧光标记的 DNA 探针能够与目 标序列结合 [2-3] .杂交完成之后,多余的探针被清洗掉,同时,细 胞核被复染剂 4'

,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色会发出蓝色的荧 光. 本试剂盒包含一组探针: MDM2(红色)位点和 CEP12 (绿色) 位点及 DAPI 复染剂. 正常细胞信号方式: 每个细胞显示两个绿色信号及两个红色 信号. 异常细胞信号方式: 细胞中若出现三个及以上红色信号且绿 色信号不小于两个. 【主要组成成分】 试剂 规格 主要成分

10 人份

20 人份 MDM2 /CEP12 探针 100μl 200μl 荧光标记探针 DAPI 0.5ml 0.5ml DAPI/抗褪色液、甘油 【储存条件及有效期】 MDM2 /CEP12 探针及 DAPI 于-20℃避光、密封储存;

不应 与有毒、有污染和有不良气味的物品混存;

开封后,探针及 DAPI

24 小时内可在 2-8℃避光、密封储存;

24 小时内不能使用完的,请放置于-20℃± 5℃避光、密封储存;

自生产之日起有效期为一年. 【适用仪器】 本试剂盒探针杂交需在杂交仪上进行杂交, 如ThermoBrite. 本试剂盒探针需在荧光显微镜下观察并分析结果.所需荧光 显微镜的配置包括: 物镜:在FISH 分析上,使用 100* 消色差浸油类型物镜可取 得满意效果. 镜油:在浸油式物镜上使用的镜油应为低水平自发荧光配方, 并专门在荧光显微镜上使用. 滤光片:建议客户处客使用探针前向滤片组供应商了解所使 用的滤片组的详细情况,以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组. 绿色荧光:激发波长为 496nm,发散波长为 520nm 橘红色荧光:激发波长为 551nm,发散波长为 572nm 【样本要求】 适用样本: 福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织和细胞.样本应根据 实验室标准程序进行采集,试剂盒检验样本的选择应由病理学专业 人员执行.样本应避免与酸、强碱接触,并避免过热. 选择的检验样本一般应在制备之后六周内进行 FISH 实验, 否 则可能会影响实验效果. 【检验方法】

一、样本收集及玻片制备:

1、样本于常温下在10%中性福尔马林缓冲液中固定6~48小时,为 了达到最佳的和均匀的固定与石蜡包埋效果,样本大小不宜超过 0.5cm3 .

2、标准操作和石蜡包埋,使用高质量的石蜡.渗透和包埋应在低 于65℃下进行.

3、切成4μm厚度的切片.

二、玻片预处理程序: 1. 56-65℃左右烤片三小时以上(过夜) . 2. 提前预热胃蛋白酶处理液(2mg/ml,10mM HCl) ,使其温度达 到37℃保温备用. 3. 二甲苯中室温放置切片

10 分钟,重复该步骤三次. 4. 100%乙醇中室温放置切片

5 分钟,重复该步骤一次. 5.依次 85%、70%乙醇中室温处理切片

3 分钟. 6.去离子水洗

2 分钟,3 次. 7.用微波炉将适量的预处理缓冲液煮沸后, 然后使其处于保温状态, 放入切片修复 20mins,或是在高压锅内加入适量的预处理缓冲液, 高压修复 5min. . 8. 取出玻片, 用去离子水洗涤三次. 将切片直接放入蛋白酶消化液 中,消化 15± 10mins. 注:根据不同的多种因素,如片子固定的条件与过程,片子厚度, 组织/细胞的特性,消化时间可以不同,我们建议:对于组织切片样 本消化 5-25 分钟,对于细胞样本消化 3-8 分钟.一般来讲,建议 预实验找到样本的最佳消化时间.且每次消化不超过