PDF《PS W 22 W》

4 5和115μ m o l / L .用组 织捣碎机将上述混合物 打成匀浆, 所得匀浆以

5 0

0 0r / m i n 的转速离心

1 0m i n后, 取上清液贮于 -

1 8 ℃冻藏备用.

2 .

3 实验方法 总酯酶活力的测定参照了文献[

4 ,

5 ] , 并做了适当改进.在试管中依次加入

1 .

9 5 0m L柠檬酸盐缓 冲溶液(

0 .

0 2 5m o l / L ) 、

5 0μ Lα -乙酸萘酯丙酮溶液(

0 .

0 1 6m o l / L )和0.5m L稀释后的上清液, 混匀后, 放入

3 0 ℃的恒温水浴

1 5m i n后, 取出试管, 在其中加

0 . 5m L固兰 B盐溶液(

0 .

8 %, 溶剂为

3 .

4 %S D S ) , 振荡混匀, 放入

3 0 ℃的恒温水浴

1 0m i n 后, 取出试管, 在595n m处测其溶液吸光度. 第32卷

2 0

0 4年11月 分析化学 ( F E N X I H U A X U E ) 研究简报 C h i n e s eJ o u r n a l o f A n a l y t i c a l C h e m i s t r y 第11期

1 5

1 7~

1 5

2 0 P S

2 2 P D F ( T r i a l V e r s i o n ) W W W . C C Y T . N E T 根据相应 p H值下的 α -萘酚标准曲线( 必须在总酯酶活力测定之前, 对每一 p H值下的 α -萘酚做相 应的标准曲线) 和测得的吸光度, 可以得到总酯酶活力的计算公式为: E=D* K* A

5 9 5nm *

0 .

3 1 5*

0 .

5 *

1 0

6 (

1 ) 式中 E为每 m L酶液所含的总酯酶活力( U/ m L ) ;

D为酶液的稀释倍数;

K为 某一 p H下α-萘酚的标准 曲线的斜率( m o l / L / A ) ;

A

5 9 5nm为反应后在波长

5 9 5n m处测得的吸光度.U定义为: 在规定条件下, 每分 钟催化得到 1μ m o l α -萘酚所需的酶量称为 1U .

2 .

4 乙酰胆碱酯酶活力测定 乙酰胆碱酯酶活力的测定方法参照了文献[ 6~

8 ] , 并做了适当改进.具 体步骤为: 于比色皿中加 入2.5m L 、

0 .

0 2 5m o l / L 、 p H8 . 0的磷酸钠缓冲溶液,

0 . l m L酶液、

0 . 1m L0 .

0 2m o l / L显色剂( D T N B ) , 混匀后加入

0 . l m L 、

0 .

0 2

8 8m o l / L底物( 硫代乙酰胆碱) , 混匀, 立即计时, 在 波长

4 1 2n m处, 每隔

1 5s 记录反应液的 A

4 1 2nm值, 持续

3 m i n .做A412nm值随时间变化曲线, 通过最小二乘 法对所做的曲线进行线 性回归.回归方程为: y= k x + b , 其中 k 是实验测得的曲线的斜率, 即为酶活.

2 .

5 总酯酶活力和乙酰胆碱酯酶活力对农药抑制的灵敏度 用柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液将农药稀释为不同浓度(

1 0~

0 . 1m g / L ) 的溶液.再用这些农 药溶液取代以上酶活测定方法中的缓冲液, 分别测定被抑制的总酯酶活力和乙酰胆碱酯酶活力, 按下式 计算农药对被检测酶活力的抑制程度: I ( %)= E

1 -E

2 E

1 *1

0 0 (

2 ) 式中 I 为抑制率( %) ;

E

1 为无农药抑制时的酶液酯酶活性( U ) ;

E

2 为某一浓度农药抑制时酶液的酯酶 活性( U ) .参考文献[

9 ,

1 0 ] , 以农药浓度的对数值为横坐标, 对应的抑制率为纵坐标作图, 通过最小二 乘法对曲线进行线性回归, 得到的回归直线的斜率 K ′ ( 浓度范围:

2 . 5~

1 0m g / L ) , 即为酶对农药抑制的 灵敏度.

3 结果与讨论

3 .

1 总酯酶活力测定的最适 p H值 考察了 p H4~ 8范围内鸡肝酶水解 α -乙酸萘酯所测得的酶活( E ) .A

5 9

5 nm 值在 p H6 . 5时最大.因图1不同浓度的农药对鸡肝酶中总酯酶活力的抑制 F i g .

1 I n h i b i t i n ge f f e c t so fp e s t i c i d e so ng e n e r a l e s t e r a s e a c t i v i t yo f f o w l l i v e r