PDF《表达传染性法氏囊病毒 VP2 蛋白的重组马立克氏病毒的构建*》

第21 卷3期中国病毒学21(3) :257-260

2006 年5月VIROLOGICA SINICA May

2006 收稿日期:2005-11-10, 修回日期:2006-01-20 * 基金项目:国家

863 高技术项目(863-2002AA245051) ;

全国博士学位论文作者专项资金(200256) 作者简介:刘红梅(1968-) ,女,河北保定籍,目前在安徽农业大学动物科技学院工作.

** 通讯作者. Corresponding author. E-mail:[email protected] 表达传染性法氏囊病毒 VP2 蛋白的重组马立克氏病毒的构建* 刘红梅,秦爱建** ,叶建强,陈鸿军,邵红霞,金文杰,刘岳龙 (扬州大学 江苏省动物预防医学重点实验室,江苏扬州 225009) Construction of Recombinant Marek'

s Disease Virus Vaccine Strain CVI988/Rispens Expressing the VP2 Protein of IBDV LIU Hong-mei,QIN Ai-jian** ,YE Jian-qiang,CHEN Hong-jun,SHAO Hong-xia, JIN Wen-jie,LIU Yue-long (Key Lab of Jiangsu preventive veterinary medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China) Abstract:An expression cassette containing the VP2 gene of infectious bursal disease virus (IBDV) strain JS under the control of the CMV promoter and an enhancer in pcDNA3.1-VP2 was amplified by PCR and cloned into pUC18-US10 plasmid to yield the transferring vector pUC18-US10-VP2. The recombinant virus, designated rCVI988-VP2, was generated by co-transfection of CEF with pUC18-US10-VP2 and the Marek'

s disease virus (MDV) vaccine CVI988/Rispens virus. PCR analysis and immunofluorenscence assays indicated that the recombinant virus was stable over

8 passages and that VP2 was expressed in CEF infected with the rCVI988-VP2. The data showed that the recombinant MDV expressing the VP2 gene of IBDV was successfully constructed and could prove to be a good strategy for IBD control. Key words:Marek'

s disease virus, VP2, Transferring vector, Recombinant virus 摘要:用聚合酶链式反应(PCR)方法从真核表达载体 pcDNA3.1-VP2 中扩增出包含 CMV 和polyA 的VP2 表达 盒基因片段,经琼脂糖凝胶电泳大小为 2.4kb;

将该基因片段插入马立克氏病病毒(MDV)CVI988//Rispens 的非 必需区 US10 片段中, 经SphI 酶切分析获得大小为 6.0 和2.4kb 两个片段, 表明成功构建出表达 VP2 基因的 MDV CVI988 转移载体 pUC18-US10-VP2 质粒.将质粒与 CVI988/Rispens 疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF) ,通过 免疫荧光方法筛选,结果获得了表达 VP2 基因的重组 MDV(rMDV-VP2) .用IBDV 特异性单克隆抗体进行间接 免疫荧光试验(IFA)证实,rMDV-VP2 病毒传至第

8 代仍能稳定表达 VP2 蛋白,这为进一步研究其免疫学特性奠 定了基础. 关键词:马立克氏病毒(Marek'

s disease virus, MDV) ;

转移载体;

重组病毒;

VP2 中图分类号:S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1003-5125(2006)03-0257-04 传染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)是由鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV) 引起的鸡和火鸡的一种高度接 触性传染病.该病主要侵害 3~12 周龄的雏鸡与青 年鸡,破坏法氏囊中的 B 淋巴细胞,导致不同程度的 免疫抑制,从而使病鸡增加对并发和继发性病毒和 细菌感染的易感性. 目前主要使用弱毒、中等毒力疫苗以及灭活疫 苗用于防制 IBD.然而,弱毒苗存在着潜伏感染以 及毒力返强的危险;

中等毒力疫苗存在损伤法氏 囊,抗原性或致病性不稳定;

而灭活苗虽然安全, 但不能对超强毒的感染提供有效的保护,而且这几 种疫苗都无法进行疫苗和野毒感染的鉴别诊断.因 此发展广谱、 高效、 实用的新型疫苗成为迫切需要.