PDF《非洲绿猴肾细胞 （Vero）》

非洲绿猴肾细胞 (Vero) 细胞介绍 Vero 细胞株是日本千叶大学的 Y.

Yasumura 和Y. Kawakita 从正常成年非洲绿猴的 肾脏建株的.

1964 年6 月15 日B. Simizu 将其从千叶大学带到国立健康研究所(NIH) 国立过敏及传染病研究所热带病毒实验室时,已传至第

93 代. 细胞特性 1) 来源:非洲绿猴正常肾 2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长 3) 含量:>1x106 个/mL 4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 5) 规格:T25 瓶或者 1mL 冻存管包装 运输和保存:使用 T25 瓶充液发送活细胞.收到细胞后,请先在显微镜下检查细 胞生长状态,并将 T25 瓶置于培养箱约 6h 或过夜后,再次检查细胞状态.若状 态良好,可进行细胞后续处理操作,按照以下方式进行.若发现可疑污染物,请 及时与我们取得联系. 细胞用途:仅供科研使用. 细胞培养步骤 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H, GIBCO, 货号 12800017, 添加 NaHCO3 1.5g/L), 90%;

胎牛血清,10%. (DMEM 液体培养基:GIBCO,11995-065) . 2)培养条件: 气相:空气,95%;

二氧化碳,5%. 温度:37 摄氏度,培养箱 湿度为 70%-80%. 3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配.液氮储存. 二.细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL 培养基混合均匀.在1000RPM 条件下离心

4 分钟,弃去上清液,补加1-2mL 培养基后吹匀.然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜) .第二天换液并检 查细胞密度. 2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养. 对于贴壁细胞,传代可参考以下方法: 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次. 2. 加2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部 分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化. 3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM 条件下离心

4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀. 4. 将细胞悬液按 1:2 到1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者 瓶中. 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存.贴壁细胞冻存时,弃 去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约 1ml 含血清的培养基后 加入冻存管中,再添加 10%DMSO 后进行冻存. 注意事项: 1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立 即与我们联系. 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注 意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃. 赛百慷(上海)生物技术股份有限公司 地址:上海市徐汇区银都路

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