PDF《一种新型连续根分泌物收集装置①》

2 其它材料和处理方式 玻璃棉: 经2mol/L 的HCl 浸泡

24 h, 然后用自 来水冲洗干净.用玻璃棒将玻璃棉压成所需的形状 和厚度. 石英砂:为白色,且无其它杂色.其粒径为 0.5~1mm,使植物生长的介质具有良好的保水性和 透气性,从而有利于植物的生长.用2mol/L 的HCl 浸泡

24 h,然后用自来水冲洗石英砂,直至洗后的 溶液 pH 为7.将石英砂装入不锈钢托盘中,15 磅 下湿热灭菌

1 h, 为了有利于装盆可放在烘箱中烘干 (70℃) ,或在烘箱中经 170℃干热灭菌

2 h.用橡 皮塞塞好无底瓶口,以一定量的玻璃棉盖在橡皮塞 上(用玻璃棒压实) ,以防石英砂漏出. 树脂: XAD-4 中性交换树脂, Amberlite IRC-50 阳离子交换树脂及 Dowex-1 阴离子交换树脂,分别 收集中性、酸性及碱性部分根分泌物.可根据试验 的目的选择以上任何

1 种、2 种或

3 种树脂,当然 也可选择其它类型的树脂.XAD-4 中性交换树脂 (Sigma) ,经甲醇淋洗除去杂质,Amberlite IRC-50 阳离子交换树脂及 Dowex-1 阴离子交换树脂(均为 Sigma) ,分别经由去离子水和 0.1mol/L HCl 或0.1mol/L NaOH 配成的 pH4.0 和pH8.0 溶液淋洗杂 质,对比淋洗前后液体的 HPLC 峰来判断是否已淋 洗干净,最后用各自的洗涤液浸泡直至装柱.装柱 时以量筒量取相应体积的树脂,反复用各自的浸泡 液冲洗量筒,倒入玻璃管柱中(管柱底部用适量的 玻璃棉塞好,外部用铝箔包好遮光) ,管柱内树脂顶 部也应塞好一定量的玻璃棉.

3 平时管理和根分泌物收集方法 根据所加的石英砂量和其饱和含水量的多少来 确定应加多少体积的营养液.将出芽时间相同的健 康种子移入石英砂中.无底瓶顶部用铝箔盖好,并 在铝箔中打一小孔,有利于幼苗从此洞长出,待幼 苗长出后,用脱脂棉塞好此洞,以防绿藻生长.以 后每隔一定时间加入相同处理的营养液,依照下列 步骤:将夹子松开,让里面的营养液流出后,加入 一定量的营养液洗涤

2 次,将里面的残余液抽干, 拧紧夹子,然后再加一定量的营养液.平时注意盆 钵中的含水量,浇蒸馏水,以维持植物正常生长所 需的水分. 当收集一定时期的根分泌物时,应将底部的夹 子拧开,先用蒸馏水洗

4 次(洗后最好抽干) ,然后 再用去离子水洗

2 次.将玻璃柱、充气泵及其它配 件装上,接上电源,这样充气泵就会充入一定流速 的气体,气泡将带动连续的溶液进入瓶中,从而无 底瓶中的液体就会循环流动,形成一个不受干扰的 连续循环根分泌物收集装置.根分泌物在经过装有 树脂的玻璃柱时就会吸附在树脂表面.调节水流速 度为

1 L/h,收集分泌物的时间以

3 天为宜. 收集一定时间后,将玻璃柱取下,抽出玻璃管 中树脂内多余的水分.分别收集各层树脂.用以前 各自的洗涤液 100ml 分别洗出根分泌物(洗4次, 每1次25 ml) .每部分根分泌物溶液分别在真空减 压条件下于 40℃水浴槽中浓缩至 15ml, 然后洗涤定 容至 20ml,过0.45um 的醋酸纤维微孔滤膜,将滤 液在冰箱(5℃)的中保存直至测定.

4 注意事项 制作无底玻璃瓶时应戴上防护眼镜,以防玻璃 碎屑不慎进入眼内.也可将玻璃瓶放在水中,然后 锯其底部,这样既可散热,又较安全.当接上玻璃 柱时应排尽其中的空气,以利于回流,然后用一根 线将玻璃柱上部和无底玻璃瓶口连接在一起,以防 玻璃柱掉下损坏.为了使玻璃瓶中的溶液能连续地 循环流动, T 形管大约位于玻璃柱中部,所加溶 液的量以充气泵充气时有连续的小水柱回流为宜. 应在适当的地方加入适量的玻璃棉,防止石英砂和 树脂掉出.同时,玻璃棉不应太多,否则不利于液 体回流.充气泵应略高于玻璃瓶中的水平面,以防 突然停电造成水倒流而损坏充气泵.由于在收集根 分泌物前一般很难洗净石英砂,所以最好先用一些 廉价且无杂质的阴阳离子交换树脂吸附溶液中剩余 的阴阳离子约