PDF《& 2034》

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3 4 !基因的克隆 取新 鲜的毛白杨叶片组织约

4 #

9 ! 按照E06=L]L公司植物总 Y DJ 提取试剂盒说明书提取 毛白杨叶片的总 Y DJ! 并用 = / ] / Y /公司反转录试 剂盒将 总YDJ 反转录合成5CDJ&

根据毛果杨 #%!&

'

)基因序列设计引物 : @

6 ;

<

= A ) * - K # J;

* ;

J= B B J= ;

;

B J;

JJJ= B J= =JJJ;

=# 和: @

6 * ;

<

= A ) * - K ! =JJ;

B = = = =J B = = ;

= = B J= ;

;

B * JJ B ;

J# &

以毛 白杨叶5CDJ 为模板! 利用引物:@6;

和>

3.R酶切:@6;

(4 + # 洗脱目的蛋白! 收集目的蛋白洗脱峰进行 蛋白的生化性质检测&

89 C= - $ >

? @ A !蛋白生化特性检测 选用 B C D E '

C B D E '

D E B'

D E C * B

1 '

>

- C'

C >

J'

O

1 F

6 T

6 R

0 O L 8和BF.*??>

等,种底物对: @

6 ;

<

= A )进 行酶 学性质分析&

: @

6 ;

<

= A ) 对BCDE'

CBDE和DEB的催化活性参照 >

/ [

0 9等( # ! ) 的方法! 对DEC*B1的催化活性参照 Y

0 5

5 0等( # $ ) 的方法! 对>

-C'

C >

J'

O

1 F

6 T

6 R

0 O L 8和BF.*??>

的催化活性参照-RX/TRQ等( # ) ) 的方法&

所有的测活反应都在! + H进行! 活性 测定 用-V61F@068$ 紫外可见分光光度计 =

2 L T * .

6 # &

以BCDE为底物! 参照 M F L 8等( # + ) 的方法测定 : @

6 ;

<

= A )在不同G >

下的催化活性&

在# + H( H范围内! 以+H为间隔测定 : @

6 ;

<

= A )在不同温度 下的催化活性&

蛋白浓度通过测量蛋白溶液在 8! , 的吸光度值确定&

动力学常 数通过测量:@6;

!? ! 处理 )% # 和 莠去津处理 (&

# 后! # $ % ! &

'

)基因分别在茎 #'

)'

( # '

叶 !'

+'

, # 和茎韧皮部 $'

%'

&

# 中的表达情况 A

0 9

4 $-

3 G T L Q Q

0 6 8G / @ @ L T

86 O

0 # $ , - . # $ + / # $ % ! &

'

)

0 8V / T

0 6 F Q @

0 Q Q F L QF

8 R L TR

0 O O L T L

8 @

5 6

8 R

0 @

0 6

8 Q #&

T L G T L Q L

8 @ @

2 LL

3 G T L Q Q

0 6 8G / @ @ L T

86 O # $ % ! &

'

)

0 8Q @ L . #! )! ( # !

1 L / O !! +! , # /

8 RG

2 1

6 L . $! %! &

#

6 O Q @ L .F

8 R L T

8 6 T . /

1 9 T

6 X @

25 6

8 R

0 @

0 6

8 #$ # ! >

!? ! )% # /

8 R / @ T / Z

0 8 L (&

# Q @ T L Q Q L R5

6 8 R

0 @

0 6

8 Q ! T L Q G L

5 @

0 V L

1 7 同类型的 ;

<

= 中通常比较保守! B端结构域含有与 第二底 物结合的位点! 在不同;

J和C B D E等多图)毛白杨 : @

6 ;

<

= A )蛋白三维结构的模拟 J4 : @

6 ;

<

= A )的三维结构% E4 用:T6O01L*$C对模拟蛋白的评估结果 A

0 9

4 )<

@ T F

5 @ F T L.

6 R L

1 0

8 96 O: @

6 ;

<

= A )G T

6 @ L

0 8 J4 <

@ T F

5 @ F T L6 O: @

6 ;

<

= A )G T

6 @ L

0 8% E4 - V /

1 F / @

0 6

86 O @

2 LQ @ T F

5 @ F T L6 O: @

6 ;

<

= A )[ 7: T

6 O

0 1 L * $ C ! ( $ ! 西北植物学报$ $卷图+毛白杨 : @

6 ;

<

= A )蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 `4 蛋白分子量标准% #4 E P ! #% !4 G - = $ / * : @

6 ;

<

= A )诱导表达% $4 G - = $ / * : @

6 ;