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EndoFectinTM -Lenti 转染试剂 用于转染核酸到哺乳动物细胞,专为高效转染HEK293T细胞而设计.

产品编号:EF001 / EF002 包装规格:1 mL /

3 mL 储存条件:4℃~8℃密闭保存,可保持稳定至少

12 个月,常温运输. ? 产品概述 EndoFectinTM -Lenti 转染试剂是一种具有专利的阳离子聚合物, 它能与核酸形成复合物, 并使该复合 物进入哺乳动物细胞.EndoFectinTM -Lenti 转染试剂专为转染 HEK293T 细胞,并包装慢病毒颗粒而 设计.该试剂即使在有血清存在的情况下,它仍然能高效的将核酸导入细胞. GeneCopoeia 公司提供的 EndoFectinTM -Lenti 转染试剂具有如下优点: y 优越的转染效率 y 重组蛋白的高表达水平 y 与含血清的培养基相兼容 y 低细胞毒性 y 易于操作 ? 质量控制 每批次 EndoFectinTM -Lenti 转染试剂均经过转染测试.将eGFP 表达质粒(GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-M02)用EndoFectinTM -Lenti转染试剂转入亚融合状态的 HEK-293 细胞,转染

16 h 后, 超过 95%的细胞表达 eGFP. ? 注意事项 质粒质量: 请务必使用高质量转染级无内毒素质粒. 通过

260 nm 光吸收测定 DNA 浓度,

260 nm /

280 nm 比值确定 DNA 纯度(比值应该在 1.8~2.0 的范围之内) .如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测 质粒的完整性. 细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞.确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染.如果 细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次. ? 瞬时转染方法 1. 接种细胞: 转染前一天,用胰酶消化细胞并计数.调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,总体积如表

1 所示,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%. 2. 准备 DNA-EndoFectinTM 复合物: DNA、EndoFectinTM 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温.依据表

1 所示,用Opti-MEM ITM (Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA.用同样的培养基稀释 EndoFectinTM 试剂.每1μg DNA 需用 3.0 μL EndoFectinTM 试剂.一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管,一边将稀释的 EndoFectinTM 试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序) .充分混匀 后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-EndofectinTM 复合物.当溶液体积较大时,请用圆底聚丙 使用说明书 GeneCopoeia Inc.

9620 Medical Center Drive, Suite

101 Rockville, MD20850, USA Web: www.genecopoeia.com Web (China): www.igenebio.com Tel (China): 4006-020-200 烯管,例如 Falcon?

5 mL /14 mL 管. Culture vessel Surface area (cm2) Volume of medium Total amount of DNA per well DNA dilution volume Ratio of EndoFectin(μL) to DNA(μg) EndoFectin dilution volume 6-well plate (one well) 9.3 2.0 mL 0.5 - 1.4 μg

50 -

200 μL

3 :

1 50 -

200 μL 3.5-cm dish 7.5 2.0 mL 0.4 - 1.2 μg

50 -

200 μL

3 :

1 50 -

200 μL 10-cm dish 49.0

10 mL 2.5 - 7.5 μg 0.5 -

1 mL

3 :

1 0.5 -

1 mL 15-cm dish 143.0

25 mL 7.5 -

20 μg 0.5 -

2 mL

3 :

1 0.5 -

2 mL 表1.转染贴壁细胞的建议初始条件 3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-EndoFectinTM 复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿.在无血清条件下转 染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴加 DNA-EndoFectinTM 复合物.转染

3 h 后,添加?体积的包含 30%血清的生长培养基. 4. 孵育细胞和分析结果: 在CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测.转染后最快

7 h 即可检测到转入基因的表达. 请自行确定最适合检测时间. ? 稳定转染方法 以上步骤同样适用于稳定转染.转染