PDF《操作步骤》

2 min,弃去过滤柱CS,收集滤液. 注意:为避免气溶胶的形成,请将移液器调整到≥750 ?l以保证一次性将所有溶液转移到 过滤柱上,如果细胞太多,将会出现裂解液粘稠的现象,造成难以吸取的情况. 9. 向滤液中加入1倍体积70%乙醇(通常为350 μl或600 μl),混匀(此时可能会出现沉淀), 得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR2中(吸附柱CR2放入收集管中),12,000 rpm (~13,400*g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放回收集管中. 注意:配制70%乙醇时请使用RNase-Free ddH2O,如果滤液体积有所损失,请相应减少 70%乙醇用量.将溶液和沉淀转移至吸附柱CR2时,体积大于吸附柱容量,可以分两次 完成. 10. 向吸附柱CR2中加入350 μl 去蛋白液RW1,12,000 rpm(~13,400*g)离心30-60 sec,倒 掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放回收集管中. 11. DNase I 工作液的配制:取10 μl DNase I 储存液放入新的RNase-Free离心管中,加入

70 μl RDD缓冲液,轻柔混匀. 12. 向吸附柱CR2中央加入80 μl的DNase I 工作液,室温放置15 min. 13. 向吸附柱CR2中加入350 μl 去蛋白液RW1,12,000 rpm(~13,400*g)离心30-60 sec,倒 掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放回收集管中. 14. 向吸附柱CR2中加入500 μl漂洗液RW(使用前请先检查是否已加入乙醇), 室温静置

2 min,12,000 rpm(~13,400*g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放 回收集管中. 15. 重复步骤14. 16. 12,000 rpm(~13,400*g)离心2 min,倒掉废液.将吸附柱CR2置于室温放置数分钟,以 彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液. 注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱CR2在室温放置片 刻,以充分晾干.如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验. 17. 将吸附柱CR2转入一个新的RNase-Free离心管中,加入30-50 μl RNase-Free ddH2O室 温放置2 min,12,000 rpm(~13,400*g)离心2 min,得到RNA溶液. 注意:洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率.RNA溶液请于-70℃保存. 产品内容 产品组成 DP433 (50 preps) 10*红细胞裂解液 (10*Red Cell Lysis Bu?er)

60 ml 裂解液RL (Bu?er RL)

30 ml 去蛋白液RW1 (Bu?er RW1)

40 ml 漂洗液RW (Bu?er RW)

12 ml 无RNA酶双蒸水 (RNase-Free ddH2O)

15 ml RNase-Free吸附柱CR2 (含2 ml收集管) (RNase-Free Columns CR2 set)

50 套RNase-Free过滤柱CS (含2 ml收集管) (RNase-Free Columns CS set)

50 套DNase I (1500 U)

1 支RDD缓冲液(DNA消化缓冲液) (Bu?er RDD (DNA Digest Bu?er))

4 ml 无RNA酶双蒸水 (RNase-Free ddH2O)

1 ml RNase-Free离心管 (1.5 ml) (RNase-Free Centrifuge Tubes (1.5 ml))

50 个 储存条件 RNase-Free DNase I,RDD缓冲液和RNase-Free ddH2O置于2-8℃保存;

加入β-巯基 乙醇的裂解液RL 4℃可放置一个月;

其他试剂室温(15-25℃)保存.