PDF《1 材料和方 法》

中H病毒学VOl_()0l CA Sl N 】 ( 、 A Vo 【 【

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99 9 HF R S V在平皿表 面室温暴 露 后存 活 力的 定量 研究李笙 保孟令_=∈用堰萎黎慝避毒车风 翊l车书医学科学硫『 脯生树溉{ 痂卅咒所- 北京 I U

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7 J ) , 己上摘要将肾综 台症 出mI热病 毒】f玻璃 I l 表面室温 条件i-分别 器露

0 、

3 0 、

6 0 、

9 0和120mi n , 观察 病 毒的 定量 存 括情 况 .

结 果柱经过t20㈨ 昀 暴露 牙HF RS V的效竹仍高达

1 0 TC[ B . 这 一结 果为HFRS的 流行 痫学 及其 防治研 究提 供 r重 要∞ 基础 数据 . 要t塑rf5肾综台症 出血热 ( HF RS ) 是 世界 眭的重要传染病 , 每年发稿人数

2 0多万 .我国1931年 以 来累 计登 记发病人数

1 0 0万有余 , 最高1 芷发病 人 数达到

1 0多万人 , 至今 仍维 持 5万左 右的 年 发病 人数¨ ] .尽管各 国专家就 该 病病 原学 、 流行病 等许 多方 面进 行 了大量 卓有 成效的工作 , 但仍有许多环 节还有待我们继续研究,如痫 原体本身及其在自然 界的存恬力就 是影响其传播 、 流行的重要一环.就病原体室温暴露 后本身的存活能力,我们进行了一 些初步的定量研究,观将结果报告如下1材料和方 法11实验材 料 所用 实验材 料包括:v e r o _ E 6细胞,第21代 HF R S V H8

2 0 5株乳小白鼠脯 悬艘, 羊抗 鼠荧 光 血清 抗体FI TC结 合物 .

1 6

4 0细胞 培养 槭和无 曲琏 璃平

1 n l

1 2 实验 方法.i21TC[ 删 定法 将病 毒 悬液 用t640生 长敞 作1u倍 系列 稀释.每个 稀释 度接种4支培 养管,每管

0 1 mj , 另 外设 一-管正常对 照、一管 阳性对 照, 接 种后 的培 养物 在 最适 条 件下 培养

8 d后,用问接 荧光 法 检测 并计算结 果.

1 2

2 H F RS V悬液的制 备及效 价删定用第

2 1 代感染HF R S V的乳 小 白鼠脑 悬液 制成 丁10浓度 的 储备 液,一7 5℃ 拣存 备用.实验 当 日取 冻存 禳世 行TC I . 测定 及进 行 暴露试 验.

1 2

3 病毒的暴露 方法无茁 歧璃 平皿5个 , 每个平皿表 丽滴 加10浓度的感染HF RS V 乳小鼠崎悬波

0 . 2mL , 并用

1 棒 滁匀 , 拿温 条 什下 ( 温度

2 7 5℃ , 球252℃ , RH

8 2 %) 放越O、

30、6O、9u、120i n i n后, 分别用嗳管 回收 于2DmL的 5个 大 试管 中. 冉舒剐用 嗽管 I

6 4

0 胞 培葬 墟18ml 反 复洗 涤 5个小 平舭 后加 八各目对 应 的大 试管 中, 混 匀后 簿个 试管 取其 中液 体2cI作10佰 系稀释(

1 0 一~1 0. . ) . 按述方法 对 鼠脑 悬液 和 回收 液进 行TC! n 删定 .

1 2 .

4 玻璃平m 表 面病 毒 同性率 的测 定以0mn收液HF R S V 教价 陈暴露前HF R S V悬液的效 价乘100%, 即 为骏 璃平 吼表 面 病毒 收率收稿日期

1 9

9 8 u I 一1

9 . 修期1998―0 7一f

1 9 车 研究 摹 国象 自然私学 基金委 受舍 资助 ¨ 期日"斟I|¨蜩)第维普资讯 http://www.cqvip.com

2 4 第l4卷

2 结果2.1HF R S Z V悬液暴露前效价的测定HF R S V 悬液暴露前效价测 定结 具 见表 l .暴露悬液tIFRS V 的效价高达

1 0

9 .

7 7 TC I D o 表IHFRSv悬 液暴 露前1CID5剥定结 果Ta M l M e e s u r e d r t ~u l f . f H FRS V TC【 n 病毒稀释度Di [ u do n t

1 t E r 西 细胞务布 一Di s t r E b ut i o n o f ― i n { e c d o n 主一阳性旧性Po s i t i v e Ne g a t i v e 阳性 胡性Po[tivcNe ra t L

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1 ] 一1010"10'..10:00l244l曰性 比Po s i l L v e, a t i o