PDF《盐鼹 监、//高又新》

1S/ 一勰第l0卷第4期 I

9 9 5年l2月 中国病毒学VI R oLo G I CA 同咖CA { '

V o1 .

1

0 N o.4 De c .

1 99

5 A E H F V感染家兔后组织脏器的 病毒抗原定位 及其病理变化 . 盐鼹 监、//高又新 张蔚英 陈红斌 向近敏

7 z、 ( 湖北医科大学病毒研究所, 武汉

4 3

0 0

7 1 ) 提要 果甩 行性 出血热病毒 ( E H F V)

1 1

4 株实验感染家兔, 用免疫荧光法(

1 FA) 及PAP双桥法 时 家兔 各脏 器组织进 行病毒抗 原定 位.同时 将各 脏 器石 蜡切 片作 常规 H― E染色 . 观察 受检组织 的 病理变化 .结果表明 - 寡兔在感染后

7 一l5无中 . 用1FA法在胸腺 、 心、 肺、肝、 脾、胰腺、 淋巴结 、 脑、 睾丸、卵巢 、 肾、 大肠及小 肠 中均检 出EHF V 抗原.用 P A P ) 叹桥 法在 细胞 水平 进 行病 毒 抗原 定位,发现所 有受检 组织小血 管及 毛细血 管 内皮 细胞均 为EHF V 的原始 靶细 胞 生殖腺 实 质细 胞病 毒抗 原阳性 ・ 为EHF V的垂直传播提供了实验依据. 从肺支气管牯膜内皮细胞、 尤其是腔面的纤毛柱状 卜皮 内检 出病 毒抗原 .推测 E HF V 通过 气溶 腔造 成传播 可 能是水 平 传播 的方式 之一.病 理学 初步观察 , 各关键词 流行性 出血热 ( E H ) 是一种 由EHF病毒 引起 的 自然疫 源性 疾病 . 目前研 究结果表 明.其发病机理主要是由于免疫病 理损伤的结 果,另外,病毒的直接破坏作用不可忽视一.为 '

进 一步 搞清病毒对 组织脏 器 的侵犯与 发病 机理 的关系 , 用EHF V l 】 4株 实验感 染家 兔.利用IFA技术及 P AP双 桥法 , 结合 病理学观察 ・ 在脏器组 织和细 胞两 个水平 I 二・研究了EHF V 感 染家兔后 病毒抗原 的动 态分 布及 其与病理变化 的关 系, 对EHF的发病机理及传播途 径有 了新 的认 识.材料与方法I家兔体重2~3 k g,

3 - -d月龄 , 雌 雄不 分,EHF V 抗体 阴性 . 由本 院动 物室提供 .

2 病毒 E HF V― H- I I {株经乳鼠脑 内传 代增 毒后,将鼠脑 研碎,用含10%胎 牛血清Eagle勺液 制成lo% ( W/ V) 混悬液, 离心取上清 , 细胞培养{ 鼻j得病毒滴度为 l o

5 T C I D / m

1 . 一7

0 ℃冻存 , 作为病毒感染家兔.

3 动物接种将EHF V- H1 I d株悬 液同 时经 腹腔 、 肌肉、 双侧 腹股沟及双 脚 掌皮 下 接种 家兔.其中腹腔 接种半立于 ]

9 9

4 年 9月

2 6日收 到1995年 5月22日修 回 *现在湖北医科大学附属第 一医院, 武汉

4 3

0 0

6 0 霉 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 d期 # 雨 霖等 : E HF V 位 爰其 病理变 化279O.8m1 / 只,肌肉仉5ml / 只.腹股沟 及双 脚掌 皮下 各0.6ml / 只. d 标本 的 收集 和 处理 接种 病毒 后第

5 ―2 O天.耳静 脉 注入 空气 , 处死动物 , 解剖取胸腺 、 心、肺、肝、脾、胰、肾、淋巴结、骑、小盼、大肠、睾丸、卵巢.将上述标本分 成 二毋 , 一份低温保 存,用来 制备冰冻切片} 一份置Boldn氏 固定剂 中,制备 石蜡 切 片用 , 分 别用 以免疫 荧光 染色 和PAP免 疫酶 染色 、 H― E染色 .

5 畦器EHF V 抗厦的动志检查将上述冰冻组织切片冷丙酮固定后・用免免疫血清(本室自制)及EHF … A . . Mc A b ( 中 国预 防 医学科 学 院病 毒所 制)分别进 行 间接 及直接 荧 光染色 .将上 述经 B o u l n氏 固定 的组纵常 规石蜡 切片.用白乳胶 作 为粘 贴剂 , 半干 后将组织 切 片捞起 , 置6O℃烘 烤 2小时 , 再置37 C6天后 ・ 置室温下 , 供PAP免 疫酶 染色 . 直 接及 阃接荧 光法 、 P AP双桥 免疫 酶法按 常 规进 行 .实验 设 正常 家 兔脏 器组织 对照.PBS及正 常 兔血清 对照,抑制 试验 的特 异性 阻 断抗体 为 兔抗 E HF V 免疫 血清 ( 本室自制 ) .