PDF《第 8卷 第 4期》

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一7第8卷 第 4期

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9 3 年12月 .

中国病毒学VI ROLOG [ CA SI N I CA 弓l(}{)Vo

1 .8 D e c . N o .4 l

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3 应用Dot-F_LISA检测 P V X、 P w 和PVS'

篓浩2.q-1010021)/,――――――一―――――一-..(内蒙古大学生物幕,呼和浩特―>

提要以NCM为固相载体 、 应用间接 E L

1 S A法测定了纯化的 P v x、 P V Y和PVsI对接种的烟 草.马铃薯块茎的芽 、 休眠块茎顶端的 P V X、 州和PVS也分别进行了测定.结果表 明检测纯病毒 P V X、 P v Y和pVS的 灵敏度分 别为

2 .

7 6 p g 、

2 .

8 3

5 p B和5.831pg.检 浸l感病烟 草汁液 马铃 薯块茎 芽、你眠块茎 顶端 的稀释 度PVX分 别为

1 /

2 9

4 8

0 ~

1 /

8 1

9 2

0 、

1 /

2 9

4 8 0和1/5120~PVY分 别为

1 /

8 1

9 2

9 、

1 /

2 9

4 8 0和l/5129~PVS分别 为1/81920~1/

327680、1/20480~1/81920和

1 /

5 1

2 0 ~

1 /

2 0

4 8

9 . 和O..,cktail.ELISA相 比.检测 P V X 和PvY的灵敏 度提高 至步 l 6倍 .实 验结 果表 明,Dc~-ELISA是检 测pVX、 p V Y和pVS灵敏而有 效 的方 法.于抗体或抗原抗 体复合物从聚苯 乙烯 固相载体上 泄漏 ( L e a k a g e ) 或者解吸 附( De s o r p f i o n ) , 因 而大大 降低 了常规 E L I S A的灵 敏度 .S a l o n e n和Vaheri[日发现如果加入聚苯乙烯塑料板 中的抗 体 浓度为

5 0 ~5

0 0 r i g / r i d时,吸附在固相 载体表面上 的igo量 只有加入量的

2 0 .

9 , 到免疫 鉴 定反应结束时 . 最初吸 附在载体表面的

2 0 .

9 的IgG只有

5 0 ~7

0 %被最终 吸附保存下来 .就 是说在 整个 E L I S A检测 中,有效蛋 白结合率大 约只有最初加入量的 l

0 . 硝 酸纤维 索膜 ( NC M) 对蛋白质有高 度的亲 和力 , 提供蛋 白 比较大的结合 表面 , 抗体或病 毒抗原 和NCM的结合较聚 苯乙烯载体更 加有效 , 使检测 的灵 敏度 明显提高 , 而且 所需检测 样 品量步 , 小到几微 升眦 .R y b i k i 和Vonwechma r r

2 2 、 l ~ r g e r [ ] 以及 P o w e l l 等[ 先后分别 以NCM为固相载体检 测了植物病毒 . 并达到了很 高的灵敏度 . B e r g e r 等啊在 N C M 上用 同接 E L I S A法,以GA R A P作 为第二抗体时检测纯化 P V Y, 其灵敏度达到

5 0

0 f g ( O .

5 0

8 ) , 应用生物素标记 G A P . , 随 后用 生物 素亲 和 素酶 复合 物(AB C ) 方 法检测 , 其灵敏 度可 达到 l o g ;

当用 活 化长臂 生物 素(Bi.tinyl十ami n c - c a p r o i c a c i d N― h y d r o x y s u c c i n i r a i d e , B A NH S ) 生 物素化 第二抗 体和生物素化 碱性磷酸酯酶单体(mo n o me r i c a l k a l i n e p h ~ s p h a t a s e , mA p ) 或生物索化碱性磷酸酯酶聚合体(polyn1erizcdalkaline口 h o s 口hatase. p A p ) 时,检测 灵敏度也 可达 到lpg.实验表 明:DB I A( Do t b l o t i mm u n o b i n d i n g a s s a y) 测定所需要最低病毒量为低于常规ELISA的1000倍 .] E ~ a n t t a

1 i和Goodwin[S3首次 以NC M 为固相 载体 , 应用双抗体 夹心法检测 P V S 、 P V X和PVY, 并 将此法命 名Dot-ELISA.他们 的实验 都证 明和 D A S ― E L I S A相比,Dot―ELISA提高 了检测 的灵敏度 a 本文于

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9 2 年 8月

3 1 日收到 .

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9 3 年424日修回 ・ 奉 课题 由国际马 镥甚 , 心资助 . ¨ 国际马铃甚・ }

1 . 驻京办事处. 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 4期 孟 清等 : 应用 Do t . E L I S A 检测PVX、 P VY 和PVS