PDF《超临界萃取-超临界色谱 -质谱联用（SFE-SFC-MS）检》

? 17? ? 超临界萃取-超临界色谱 -质谱联用 (SFE-SFC-MS) 检 测血液中常见毒物的应用研究 摘要:建立了一种在线超灵界萃取、超临界色谱和质谱联用相结合的检测分析方法.

方法 取3mm的干斑置于提取器中,上样分析.结果测定6种毒物的线性范围在10~1000 ng/mL,回收 率均在68.8~110.2之间,检出限在1~10 ng/mL之间.整个方法具有简便,快速,准确、灵敏度 高等特点,为检验血中的毒物提供了一种全新的分析方法. 关键词: 超临界萃取 超临界色谱 血 毒物 超临界萃取(SupercriticalFluidExtraction,SFE)是一种物理分离和纯化的方法,利用压力 和温度对 CO2 超临界流体溶解能力的影响而进行的,其萃取过程由萃取和分离过程组合而成. 在超临界状态下,将CO2 与待分离的物质接触,使其按照沸点高低、极性大小、和分子量大 小将成分依次萃取出来.对应各压力范围所得到的萃取物不是绝对单一的,但可以通过控制 条件得到最理想比例的混合成分,然后借助减压、升温的方法使超临界流体变成普通气体, 被萃取物质则完全或基本析出,从而达到分离提纯的目的.目前,超临界萃取和超临界色谱 技术在天然药物提取、环境保护等领域的应用已有报道,但在血液中的毒物分析检测报道较 少.本研究通过超临界萃取仪、超临界色谱和质谱联用相结合,通过对超临界萃取条件进行 了摸索,建立了一种全新的在线萃取和液质联用相结合的毒物分析方法.通过改变超临界萃 取的条件,摸索出血液中地西泮、阿普唑仑、三唑仑、艾司唑仑、硝基西泮和氯硝西泮

6 种 安眠类药物的最佳分析方法.该方法具有操作简便、快速、样品处理简单、灵敏度高、重现 性好等优点.

1 材料与方法 1.1 试剂和材料 标准对照品: 地西泮(diazepam)、 阿普唑仑(alprazolam)、 三唑仑(triazolam)、 艾司唑仑(estazolam)、 硝基西泮(nitrazepam) 、氯硝西泮(clonazepam)购自公安部物证鉴定中心.以上纯品均用甲 醇配制成 1mg/mL 的标准溶液.Whatman

903 DBS 卡购自 T 通用电气医疗集团. Nexera UC 在线超临界萃取-超临界色谱仪(岛津) ;

LCMS-8040 三重四极杆质谱仪(岛津) . 1.2 仪器条件 1.2.1 超临界萃取条件 1.2.2 超临界色谱-串联质谱仪条件 色谱柱为岛津 GL 公司色谱柱(Inetersil SIL 4.6 mm I.D.*150 mmL.,

5 μm) ;

柱温:40℃;

流动 相A:CO2;

流动相 B(改性剂) :甲醇;

流速:3 mL/min;

萃取及洗脱程序见表 1. 表1流动相和梯度洗脱条件 ? 18? ? 质谱条件:电喷雾离子源,正离子模式;

雾化气流速:3.0 L/min;

干燥器流速:15 L/min;

DL 温度:200℃;

加热模块温度:400℃;

MRM 参数见表 2. 表2监测离子对和碰撞能 名称 保留时间 (min) 定量离子对 定性离子对 碰撞能量(eV) 定量/定性 地西泮 5.550 285.10>193.10 285.10>154.10 -32/-28 硝西泮 6.353 282.05>236.10 282.05>207.25 -24/-35 氯硝西泮 6.474 316.00>270.05 316.00>241.05 -25/-37 艾司唑仑 9.408 295.10>267.05 295.10>267.05 -25/-45 阿普唑仑 10.231 309.10>205.10 309.10>281.00 -45/-25 三唑仑 10.902 343.00>308.05 343.00>238.90 -28/-35 1.3 样品处理 标准品的制备:将1000 ng/mL 的标准混合液,使用甲醇稀释至

500、

200、

100、

50、10 ng/mL 的标准溶液,用于校准曲线的制作.每份标准溶液取

20 ?L 点样到 Whatman

903 DBS 卡上. 室温晾干后打孔取直径

3 mm 的干斑置于提取器中,上样分析. 样品的制备:取20 ?L 人血点样到 Whatman