PDF《细胞培养方法介绍》

107 开始细胞培养 此程序基于200mL Thermo Scientific HyQShpere微载体旋动培养.

推荐以每升 20克为起始,因此对于200mL的培养体 系,需要用4 g微载体. 1.为了避免细胞附着在玻璃器皿上,需要用硅 树脂溶液进行处理.硅化时用Sigmacote?, 货号SL-2,或同等产品.根据厂商的说明, 概括如下.

2 . 将4g微载体重悬于细胞培养级水(SH30259)或磷酸盐缓冲液(PBS), 无钙镁离子(SH30526),然后121℃高 压灭菌至少30分钟. 3.去除高压灭菌后的液体,如果需要可冲洗 一下,然后将微载体重悬于培养基中,置 于培养箱中平衡至少60分钟. 4.细胞接种量一般在1.5-4.0*105个细胞/毫 升范围内,对于200 mL的培养体系,使用 2.0*105个细胞/毫升的接种密度,需要 4.0*107个细胞. 5.将细胞加入到预热的微载体-培养基悬液 中,加入预热的培养基至体积200 mL. 利用HyQSphere微载体进行细胞培养 此方法适用于HyQSphere FACT 102L, CGEN 102L, Pro-F 102L, P Plus 102L和P 102L微载体. 细胞培养方法介绍a.对于高接种率的细胞,根据细胞类型确 定能够使细胞达到均匀分布的最佳搅拌 速率. ?在整个培养期间,以45-60 rpm的转速 旋转转瓶(使用MDCK,Vero,原代 CEFs和其他稳健的传代细胞系时). b.对于低接种率或者使用不含动物蛋白培 养基的培养物,培养初期使用间歇式搅 拌,在保持微载体悬浮的情况下,尽量 缓慢搅拌. ?例如,以45-60rpm的转速搅拌1分钟,停7-10分钟.避免细胞缺氧.细胞 贴壁后,用预热的培养基将体积补足. 6.根据细胞生长特点需要进行维持培养.有 时可能需要进行换液. a.使用洁净的玻璃器皿. b.使用Sigmacote产品,将所有将要暴露 于微载体的玻璃器皿的表面进行充分的 包被处理. c.控干玻璃器皿中多余的Sigmacote,使其 风干(一般18-24个小时). d.再次洗涤和冲洗玻璃器皿,最后用去离 子水充分冲洗干净.