PPT《实验二、根系活力的测定 ——a-萘胺氧化法》

实验

二、根系活力的测定 ――a-萘胺氧化法 植物生物学实验

(二)植物生理学基础与综合实验 南京师范大学生命科学学院

一、实验目的 了解根系活力的生理意义;

掌握a-萘胺氧化法 测定根系活力的原理与方法.

了解植物生理学实验设计中的一些注意事项.

二、实验原理

(一)植物根系的生理功能: 吸收:水分、无机盐、CO2. 输导 固着 合成 贮藏 根系吸收无机盐的过程: 部位:根尖,根毛区最活跃.步骤1,呼吸释放CO2;

2,形成H2CO3;

3,H+与HCO3 -吸附在根表面.4,溶液中阴阳离子分别与HCO3 -、 H+交换.5,吸收,进入根内部.6,运输. 根系活力即根的生长情况和代谢水平.它直接影响植物地上部的生长和营养状况以及产量.植物根系中的过氧化物酶能氧化α-萘胺,生成红色的α-羟基-1-萘胺,并沉淀于根表面,将根系染成红色.一般来说根呼吸强度越大,即该酶的活力越强,对α-萘胺的氧化力也越强,染色也越深.可以根据根系表面着色深浅,定性观察并判断根系活力大小,也可通过测定溶液中未被氧化的α-萘胺的量,以定量测定根系活力.

(二)根系活力的意义与测定方法 定性观察 根系表面红色越深,说明根系活力越强. 定量测定 剩余的α-萘胺在酸性环境中可与对氨基苯磺酸(sulfanil-amide)和亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮染料. 定量测定 对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺 生成的红色偶氮化合物在pH 7.0时在510 nm处有最大吸收峰,可用分光光度法测定光吸收值,从而利用此反应来间接测定溶液中α-萘胺的量. 注意: OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度,但降低偶联作用的速度,颜色比较稳定.增加温度可以增加反应速度,但降低重氮盐的稳定度,所以反应需要在相同条件下进行.

三、实验材料与仪器设备

(一)实验材料 水稻(Oryza sativa L.)等水生植物的须根系.

(二)仪器与用品 分光光度计、天平、恒温培养箱、三角烧瓶、量筒、移液管、剪刀、玻棒.

(三)试剂 α-萘胺溶液:先用少量的95%酒精溶解,然后加水定容成.配制50 μg/mL、50 μg/mL溶液.0.1 mol/L磷酸缓冲液,pH 7.0. 1%对氨基苯磺酸溶液:溶解于30%的醋酸溶液中.0.01%亚硝酸钠溶液.

四、实验步骤

(一)定性观察:处理:挖取处于不同生长状态的须根系植株(如水稻、豌豆苗根系等)数株,洗净根部后再用滤纸吸去根上附着的水分. 2.观察 将植株根系浸入盛有25 μg/mL α-萘胺溶液并用黑纸包裹的容器中,静置24-36小时后观察根系着色情况.比较不同植株根系活力大小,并与植物生长势比较,分析植物生长势与根系活力之间的关系.

(二)定量测定 取50 μg/mL 的α-萘胺溶液和0.1 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL,置于三角瓶中,混匀.称取根系2 g浸没于三角瓶中的溶液中.同样地,取50 μg/mL的α-萘胺溶液和0.1 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL,置于另一三角瓶中,混匀,不放根系作为对照.

1、实验处理

2、实验初始值测定 5min后,分别从两瓶中各取2 mL溶液,按照步骤4作第一次测定.记录OD(实验组)与OD0(对照组).

3、实验终了值测定 将两三角瓶置于25℃恒温箱中避光保温60min后,各取2 mL ,按照步骤4作第二次测定.记录 OD'(实验组)与OD'0(对照组).

4、a-萘胺含量测定 取2 mL培养液加10 mL水混匀,再顺次加入1 mL对氨基苯磺酸溶液与1 mL亚硝酸钠溶液,混匀,观察溶液颜色变化,再定容至25 mL.室温25min后,于510nm处测定吸光度(OD)值. 5.标准曲线制作: 以50 μg/mL的α-萘胺溶液为母液,配置