DOC《HPLC培训教程》

R)计算理论塔板数,所得值称为有效理论塔板数(N有效或Neff). ?理论塔板高度(theoretical plate height,H)――每单位柱长的方差.H=.实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算:H=,H有效=. 4.相平衡参数 ?分配系数(distribution coefficient,K)――在一定温度下,化合物在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的浓度之比.K=. 分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关,也与温度、压力有关.在不同的色谱分离机制中,K有不同的概念:吸附色谱法为吸附系数,离子交换色谱法为选择性系数 (或称交换系数),凝胶色谱法为渗透参数.但一般情况可用分配系数来表示. 在条件(流动相、固定相、温度和压力等)一定,样品浓度很低时(Cs、Cm很小)时,K只取决于组分的性质,而与浓度无关.这只是理想状态下的色谱条件,在这种条件下,得到的色谱峰为正常峰;

在许多情况下,随着浓度的增大,K减小,这时色谱峰为拖尾峰;

而有时随着溶质浓度增大,K也增大,这时色谱峰为前延峰.因此,只有尽可能减少进样量,使组分在柱内浓度降低,K恒定时,才能获得正常峰. 在同一色谱条件下,样品中K值大的组分在固定相中滞留时间长,后流出色谱柱;

K值小的组分则滞留时间短,先流出色谱柱.混合物中各组分的分配系数相差越大,越容易分离,因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提. 在HPLC中,固定相确定后,K主要受流动相的性质影响.实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值,以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间,达到分离的目的. ?容量因子(capacity factor,k)――化合物在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的量之比.k=.因此容量因子也称质量分配系数. 分配系数、容量因子与保留时间之间有如下关系:k===K=,t'

R=k t0.上式说明容量因子的物理意义:表示一个组分在固定相中停留的时间(t'

R)是不保留组分保留时间(t0)的几倍.k=0时,化合物全部存在于流动相中,在固定相中不保留,t'

R=0;

k越大,说明固定相对此组分的容量越大,出柱慢,保留时间越长. 容量因子与分配系数的不同点是:K取决于组分、流动相、固定相的性质及温度,而与体积Vs、Vm无关;

k除了与性质及温度有关外,还与Vs、Vm有关.由于t'

R、t0较Vs、Vm易于测定,所以容量因子比分配系数应用更广泛. ?选择性因子(selectivity factor,α)――相邻两组分的分配系数或容量因子之比.α== (设k2>

k1).因k=t'

R/t0,则α=,所以α又称为相对保留时间(《美国药典》). 要使两组分得到分离,必须使α≠1.α与化合物在固定相和流动相中的分配性质、柱温有关,与柱尺寸、流速、填充情况无关.从本质上来说,α的大小表示两组分在两相间的平衡分配热力学性质的差异,即分子间相互作用力的差异. 5.分离参数 ?分离度(resolution,R)――相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值.也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度.R=.当W1=W2时,R=.当R=1时,称为4σ分离,两峰基本分离,裸露峰面积为95.4%,内侧峰基重叠约2%.R=1.5时,称为6σ分离,裸露峰面积为99.7%.R≥1.5称为完全分离.《中国药典》规定R应大于1.5. ?基本分离方程――分离度与三个色谱基本参数有如下关系: R=** 其中称为柱效项,为柱选择性项,为柱容量项.........