PDF《产品说明书》

1 /

2 US EVERBRIGHT? INC.

技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 产品说明书产品名称:Super ECL Plus(超敏化学发光检测试剂盒) 产品货号:S6009 产品内容及规格:100mL(A 液50 mL +B 液50 mL) ,500mL(A 液250 mL +B 液250 mL) 储存条件 4℃密封避光保存一年以上,短期可放置室温. 产品描述 Super ECL Plus 免疫印迹底物是增强型化学发光 (ECL) HRP 底物,可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现低皮克 级的蛋白检测. Super ECL Plus 底物可为使用辣根过氧化物酶(HRP) 偶联物的免疫印迹实验提供明亮的信号和低皮克级检测灵 敏度.该ECL 底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体 稀释液,以出色性能、通用性和高性价比,满足用户的免疫 印迹应用需求. Super ECL Plus(超敏)特点: 1. 具有极高灵敏度:检测硝化纤维素膜或 PVDF 膜上低皮 克级的蛋白条带;

2. 长信号持续时间:条件优化的情况下,经底物孵育的印 迹条带能够持续输出

6 至8h的可检测光信号;

3. 稳定试剂:工作液在

24 h 内保持稳定;

4. 价格经济:配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检 测?0.2-1 μg/mL 一抗(或1mg/mL 的稀释 1:1,000-1:5,000) ? 10-50 ng/mL二抗 (或1mg/mL 的稀释 1:20,000-1:100,000) 使用方法 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤,1.0-0.2 μg/mL 一抗孵育

1 h 或过夜,洗膜后,10-50 ng/mL 二抗孵 育30-60 min. 2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液: 分别取等体积的溶液 A 和B,放入干净容器中混合. 注: 建议立即使用工作液, 室温放置数小时后仍可使用但灵 敏度略有降低. 3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥. 将膜完全浸入发光工作液(0.1 mL 发光工作液/cm 膜)中, 与发光工作液充分接触.室温孵育 3-5 min. 4. 取膜,弃发光工作液,用吸水纸略吸去过多的液体.将 膜放在两片保鲜膜中间,随后进行压片检测或成像仪检测. 5. 压片检测:将膜固定于片夹内,蛋白带面向上.暗室内 压片

1 min,立即显影定影,根据结果再调整压片时间.或 直接分别压片

30 s、

1、

3、5 min,然后一起显影定影观察 结果. 6. 成像仪检测:将膜放置到成像仪内,参考仪器说明书进 行检测. 注意事项 1. 步骤 1~4 可在日光灯下操作,但发光液曝露于强光下时 间过久灵敏度可能略有降低, 移到暗房操作可避免之.戴手 套可以避免在膜上留下手印. 2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化 失去线性关系,曝光不足则条带模糊. 3. 发光工作液孵育约

3 min 后膜上的条带发光. 强条带发光 在暗房中肉眼可见, 低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可 见但可使 X 光胶片曝光.不能简单以肉眼观察判断条带发 光时间.肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光 胶片感光,因而弱带可曝光 1-10 h.如果曝光后条带不佳, 可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发 光和曝光.

2 /

2 US EVERBRIGHT? INC. 技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 4. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起 始浓度为一抗 1:1000~1:5000,二抗 1:20,000~1:100,000. 抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败. 5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质 量保鲜膜. 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影 曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小. 7. NaN3 能抑制 HRP 活性, 回收第二抗体应避免使用 NaN3, 如必需使用勿超过 0.01%. 常见问题 问题 可能的原因 解决方案 反向图像(即白色条带黑色背景) 体系中过多的 HRP 进一步稀释 HRP 结合物 膜上有棕色或黄色条带 在暗室污点发光 信号持续时间少于

8 h 信号微弱或没有 体系中太多的 HRP 耗尽底物, 导致信号很快 消退 进一步稀释 HRP 结合物 抗原或抗体量不足 增加抗原或抗体含量 蛋白转膜效率过低 优化转膜 高背景 体系中过多的 HRP 进一步稀释 HRP 结合物 封闭不够 优化封闭条件 封闭液不合适 尝试换另一种封闭液 洗膜不够 增加洗膜的时间、次数或洗膜液体积 过度曝光 降低曝光时间 抗原或抗体浓度过高 降低抗原或抗体浓度 蛋白条带内有斑点 蛋白转膜效率过低 优化转膜程序 水化膜不均 正确执行制造商的推荐水化膜过程 膜和膜之间存在气泡 曝光前去除气泡 相关产品 货号 产品名称 货号 产品名称 B6027-200mL Brightein Protein Gel Stain,1* S6008-500mL Super ECL Prime(灵敏化学发光检测试剂 盒) B6027-1L S6010-100mL Super ECL Star(特超敏化学发光检测试剂 盒) B6027-5L S6028-100mL Super Atlas ECL(特超敏/稳定化学发光检 测试剂盒) S6038-100mL Rhea ECL (化学发光检测试剂盒) S6038-500mL W6006-100T WonderOrangeTM Protein Quantitation Kit S6008-100mL Super ECL Prime (灵敏化学发光检测试剂盒) W6006-1000T