PDF《ICS 13.100》

p ―― 早熟染色体凝集环每细胞数;

96.04 ―― 采用20%的允许误差,令1.96 =p*20%,根据95%可信区间计算获得的常数. 7.3 检测早熟染色体凝集环每细胞数和 95%可信区间的计算 检测早熟染色体凝集环每细胞数的计算按照式(3)计算: p 3) 式中: p ―― 检测到的早熟染色体凝集环每细胞数;

x ―― 检测到的早熟染色体凝集环数;

n ―― 早熟染色体凝集分裂相数. 检测早熟染色体凝集环每细胞数的95%可信区间按照式(4)计算: 95%CI = p ? 1.96Sp 4) 式中: 95%CI ――95%可信区间;

p ―― 检测到的早熟染色体凝集环每细胞数;

Sp ―― 早熟染色体凝集环每细胞数的标准误,按照式(5)计算: WS/T 615―2018

5 Sp 5) 式中: Sp ―― 早熟染色体凝集环每细胞数的标准误;

x ―― 检测到的早熟染色体凝集环数;

n ―― 早熟染色体凝集分裂相数. 7.4 受照剂量的估算 将所要估算剂量的标本中得到的早熟染色体凝集环每细胞数及95%可信区间的上下限代入建立的剂 量-效应曲线,估算出受照剂量.事故受照人员生物剂量估算示例参见附录D.

8 质量控制 8.1 进行早熟染色体凝集制备与分析的实验室应有

2 名(含)以上专业技术人员,掌握电离辐射生物 效应和细胞遗传学基础知识, 熟练掌握早熟染色体凝集环显微镜下分析技术. 每个早熟染色体凝集环需

2 名专业技术人员相互确认. 8.2 标本应有唯一性编号. 8.3 标本分析完毕后,应置于玻片盒内保存,并做好记录. WS/T 615―2018

6 A A 附录A(资料性附录) 主要仪器设备和试剂配制 A.1 主要仪器设备 A.1.1 恒温培养箱:用于细胞培养. A.1.2 普通离心机:水平式离心机,用于收获细胞. A.1.3 光学显微镜:用于分析早熟染色体凝集环. A.1.4 恒温水浴箱:用于收获细胞. A.1.5 低温冰箱(-20℃)和普通冰箱:用于贮存少量实验用试剂. A.2 主要试剂的配制 A.2.1 Calyculin A工作液:将1 mL无水乙醇加入到10 ?g花萼海绵体诱癌素A粉末中,混匀后置 于-20℃低温冰箱保存. A.2.2 冈田酸工作液:将1 mL二甲基亚砜加入到25 ?g冈田酸粉末中,混匀后置于-20℃低温冰箱 保存. A.2.3 RPMI1640 全培养基: 1L RPMI1640 培养基中含有10.4 gRPMI1640 粉末、 1.3 g无水碳酸氢 钠,pH在7.0~7.2之间.RPMI1640 全培养基中含20%胎牛血清、青霉素100 IU/mL、链霉素100 mg /mL、植物血球凝集素200 ?g/mL. A.2.4 低渗液:称取5.59 g氯化钾(KCl)双蒸水溶解后定容到1 L,终浓度为0.075 mol/L,37℃ 保存. A.2.5 固定液:将甲醇与冰乙酸以3/1(体积比)的比例混匀,使用前新鲜配制. A.2.6 磷酸缓冲液:称取4.705 g磷酸氢二钾及4.54 g磷酸二氢钠双蒸水溶解后定容到1 L,pH 为6.8,终浓度为1/15 mol/L,4℃保存. A.2.7 Giemsa染液:称取1.0 g吉姆萨粉末放入研钵中,加入少量甘油混匀研磨,边研磨边加入甘 油至66 mL,充分混匀后,置于60℃水浴箱中2 h.冷却至室温后,加入66 mL甲醇,充分搅拌混匀, 避光密闭保存. 注:试剂级别为分析纯. WS/T 615―2018

7 B B 附录B(资料性附录) 早熟染色体凝集环示例 早熟染色体凝集环示例见图B.1. a) G2/MCPCC细胞中的1对空心环 b) G2/MCPCC细胞中的1对实心环 c) M/ACPCC细胞中的1个空心环 d) M/ACPCC细胞中的2个空心环 图B.1 早熟染色体凝集环示例 WS/T 615―2018

8 C C 附录C(资料性附录) 早熟染色体凝集环分析记录表和检测报告 C.1 早熟染色体凝集环分析记录表 早熟染色体凝集环分析记录表见表C.1. 表C.1 早熟染色体凝集环分析记录表 第页,共页样本编号: 受检者姓名: 分析细胞数量: 检测到早熟染色体凝集环数: 载玻片编号: 显微镜编号: 注:适用于记录每个细胞中的早熟染........