PDF《薛小平徐志马文煜闫岩尹文》

~ z , 第l4卷第 l 期1999年 3月中国病毒学VIR0L.

G I C A S I N I C A Vo l l

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1 M a r

1 99

9 汉 坦病 毒 陈株 s基 因编 码 区的克 隆、序列分析 及 表达 薛小 平徐志马文煜 闫岩尹文―― 芳琳吴兴 安赵茜白文 涛(第四军 医大学 微生 物学教 研室. 西安

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3 2 ) 足;

一3Z,摘要从议 坦病 毒 陈株 感 染的 Ve r o - E 6细胞 裂解 液 中提取 病毒RNA, 经逆 转录PCR获得 病毒 s 基 因编 码区约13kbcDNA片段 . 克 隆该 片段 后进行棱苷 酸 序列 测定,并与 汉坦病毒76―118株 进行同源 性 比较 . 结果 二者 核苷 酸 序列 同源性 为86%. 推导的彝 基酸 序列 同源性 为97%.将 该基 固 片段插 入原 核表 达载 体pGEX一4T一

1 , 在太弱杆 菌 中获 得高 效表达.表达 产物为GS T― N P融台蛋白.S DS - P AG E检测表达 蛋 白分 子约

7 2 k D 左右.We s t e r n b l o t t i n g和ELISA试验 结 果表 明,表达产物 可 与多 株抗 授坦 病毒 核蛋白的 Mc A b发 生反 应, 其抗 原表位 及Mc A J o反应 谱与76n8株相比存在某 些差 异.关键词 汉 坦病 毒,S基 因, 核苷 酸序列 分析,基因表达 汉坦病 毒 s基 因编码 的核 蛋白( NP ) 在该病 毒 三种 结构 蛋 白中含量 最高, 免疫原性 最强的.在 肾综合 征 出血热 ( HF R s ) 患者和灭 活疫苗 接种者 体 内抗 NP抗体 出现 早、持续久, 用重组NP免疫动物虽未测到 中和性 抗体 , 但 对动物仍具有免疫保护作 用_

2 J .我 国学 者徐 志凯 、 梁 米芳等通过对 NP的的抗原性分析 , 推测在 NP上可 能存在有 中和性抗 原位 点_2,但尚缺 乏 基因水平 的证据 .我 国是 HF R S高发 区,先后 从不同疫 区、不同宿 主 动物 及 患者 体 内分 离出多株病 毒, 加强对我 国各疫 区流行株基 固结构 的研 究, 通过 基园序列的分析 比较 研究我 国汉坦 病毒的起源 和变异 . 无论对汉 坦病 毒基 因结 构和 功能 的研 究, 还是 HF R S的分 子 流行 病学研 究 以及 建立我 国汉坦病 毒基因库 , 都具 有重 要意 义.本研 究 旨在 通过对 从我国分离到 的汉 坦病毒陈株 s基 因的 序列 测定, 推导其氨 基酸序列 , 与国外 已发表 的汉坦病 毒 s基 因作 同源性 比较,以及对表达 重组 NP的抗 原性 分析, 为明确汉坦病毒核蛋 白的抗原性 质提供 有用的证据 .

1 材料和方 法1.1病毒与 细胞 Ve r o - F

4 细胞 由中 国药 品生 物制品检定 所 引进 , 汉坦病毒陈株由安 徽省医科 所倪大石主任惠赠 , 为I型汉坦 病毒l.经本 室连续 乳 鼠脑 内传 代增 毒至LD5.为l0..病 毒100TC I D5 ¨ 感染 Ve r c - E 细胞 , 维 持培 养至 第八 天,免疫 荧光 检测 达" 卅 ~卅" , 供提 取 病毒 RNA用.1.2单克隆 抗体 【 Mc Ah 】 共选 用l8株 抗汉 坦病 毒Mc A b L

2 l 和 1株抗 答胱 甘肽转 移酶(GsT) Mc A b .在抗汉坦病 毒Mc Ab中,

1 A

8 、

3 G1 l 、 A

3 5 ( 由陈伯 权教 授 惠赠 ) 、 Hl l ( 由唐家 琪研 究 员惠 赠)、3A9 、

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2 Al 1为抗收稿 日期 {

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7 奉课 题 受国家 自然 科学 基盘 ( 编号 :

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3 8 ) 和军队杰 出』 、 才 基金资 助j维普资讯 http://www.cqvip.com 第 1期 薛小 平等:汉坦病 毒陈 株 S基 因编 码 区的 克隆 、 序列分析 及表达49汉坦 病毒NP组特异性 Mc Ab ;