PDF《西瓜种传枯萎病病原菌鉴定及其防控方法》

2010) , 种子各部 位携带尖孢镰刀菌的比例与幼苗的枯萎率相关 (Mi- chail et al., 2002) .2007 年国外首次报道西瓜上种 传枯萎病的发生和危害, 被严重感染的种子样品种植 后其幼苗发病率达到 50% 以上 (Boughalleb &

El- Mahjoubet al., 2007) , 而在我国关于由尖孢镰刀菌引 起西瓜种传枯萎病在生产上发生和危害尚未见报道. 目前, 西瓜枯萎病可以通过选用抗病品种、 实行 轮作、 土壤消毒、 嫁接育苗和施用化学农药等技术进 行防治 (徐伟慧等, 2013) .抗病育种是防治西瓜枯 萎病最有效的一种途径, 但病原菌容易产生变异, 抗 病育种工作难度较大;

我国耕地面积有限, 特别是在 设施栽培条件下, 很难完全实行轮作倒茬;

而使用大 剂量化学杀菌剂给生态环境和人体健康带来严重危 害.西瓜嫁接栽培是目前防治土传西瓜枯萎病最 有效的方法之一.日本从

20 世纪

20 年代开始, 到80 年代选育出抗尖孢镰刀菌南瓜专化型 F. oxyspo- rum f. sp. lagenariae 的南瓜品种 Renshi 作为砧木并 广泛应用 (Sakata et al., 2007) , 是目前应用嫁接技术 防治西瓜枯萎病最为普遍的国家.我国应用嫁接技 术防治西瓜枯萎病始于

20 世纪

70 年代,

80 年代末 已广泛应用于生产 (郑高飞等, 2000;

苏胜举等, 2005;

冯春梅等, 2006) , 该技术的应用显著降低了枯 萎病田间发病率和病情指数 (徐敬华等, 2004) . 西瓜枯萎病在田间的常见病害症状有以下3种 类型, 包括发生在幼苗期的猝倒型, 发生在团棵伸蔓 期的侏儒型和发生在结瓜期的萎蔫型, 这是西瓜枯 萎病的典型症状 (臧君彩等, 2001) .2016 年年初, 我国西瓜产区出现一种新的西瓜幼苗病害, 其症状 与西瓜枯萎病常见的3种类型完全不同.该病发生 在育苗期, 采用嫁接育苗方法不能防止幼苗发病和 接穗死亡, 发病率高达80%, 在育苗期造成毁灭性的 危害和严重的损失.本试验采集典型发病样本进行 病原菌分离和纯化, 根据病原菌的形态特征和病原 菌rDNA 内部转录间隔区 (internal transcribed spac- er, ITS) 序列对分离物进行鉴定, 明确西瓜幼苗新发 病害的病原菌, 同时初步探索了田间幼苗发病的感 染途径和病害防治方法, 以期为该病害的防控提供 科学依据.

1 材料与方法 1.1 材料 供试病样及西瓜品种: 供试发病幼苗为2016年 1月于山东省昌乐县的西瓜育苗基地采集.西瓜京 颖种子、 带菌的京欣

307 种子由北京市农林科学院 蔬菜研究中心提供. 药剂: 6.25% 精甲霜灵?咯菌腈 (metalaxy1-M? fludioxonil) 悬浮种衣剂、 2.5% 咯菌腈 (fludioxonil) 悬浮种衣剂和 50% 咯菌腈 (fludioxonil) 可湿性粉 剂, 瑞士先正达作物保护有限公司. 培养基: 马铃薯葡萄糖琼脂 (potato dextrose agar, PDA) 培养基: 马铃薯

200 g、 葡萄糖

20 g、 琼脂 粉20 g、 蒸馏水

1 L;

康乃馨水琼脂 (carnation leaf agar, CLA) 培养基:

20 g 琼脂、 蒸馏水

1 L, 在直径

9 cm的培养基平板上加入大小为3~5 mm2 的康乃馨 叶片 5~10 片;

马铃薯乳糖 (potato lactose, PL) 培养 基: 土豆

200 g、 乳糖

20 g、 蒸馏水

1 L.所有培养基 均于120℃高压灭菌20 min待用. 试剂及仪器: 真菌基因组 DNA 快速抽提试剂 盒、 高纯度dNTP、 Taq DNA扩增酶、 10*Buffer、 DNA Marker II, 北京三博远志生物技术有限责任公司;

其 它无机试剂均为国产分析纯.MJ-150F-1霉菌培养 箱, 上海一恒科学仪器有限公司;