PDF《Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X)》

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网址:http://www.beyotime.com 碧云天网站 微信公众号 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 产品编号 产品名称 包装 D0140 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 1ml 产品简介: ? 碧云天的Gel-Red(凝胶红)核酸染料是一种EB (Ethidium bromide,溴化乙锭)的升级换代产品,用于凝胶中DNA、RNA等核 酸的染色.Gel-Red具有安全(致突变性极低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点,凝胶中的核酸在使 用本产品染色后用适当紫外灯(300nm左右波长)检测呈现红色荧光,适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统. ? Gel-Red比EB和SYBR Green更安全.Gel-Red在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性.艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明,Gel-Red的诱变性远小于EB.EB在多种致突变测试中呈现很强的诱变性,而Gel-Red仅仅在浓度高达20微克/ 毫升时,并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性.通常Gel-Red在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升,大大低于可导致诱变 的浓度.Gel-Red和碧云天的另外一种安全型核酸染料Gel-Green,由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞,从而大大 降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性.而SYBR Green染料可以穿透细胞膜,进入活细胞并染色DNA,并且有报道 SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变. ? Gel-Red检测灵敏度高,对于小分子量核酸的染色效果好.Gel-Red的检测灵敏度比EB高8-10倍,在检测低浓度、微量DNA 或RNA方面比EB更佳,尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏.在使用浸泡染色法时,Gel-Red和SYBR Gold的灵敏度相近 甚至更高;

与SYBR Gold不同的是,Gel-Red预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度.EB对于小分子量核酸的染色效果差, 而Gel-Red对于小分子量核酸的染色效果很好,便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段.推荐使用的Gel-Red浓度, 其检测效果略优于EB.如果希望获得更高的染色灵敏度,可以适当提高Gel-Red的工作浓度. ? Gel-Red的稳定性好,染色重复性高.含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差,这通常是由于SYBR系列染料的稳 定性差导致的.而Gel-Red的稳定性很好,可以室温长时间保存及使用微波炉加热.Gel-Red的光稳定性良好,可以在室内 正常光线下操作而无需避光.由于其热稳定性和光稳定性,含Gel-Red的凝胶在核酸染色时的重复性非常好. ? Gel-Red可以使用和EB相同的检测体系.Gel-Red和EB的激发光和发射光都非常接近,可以直接用Gel-Red替换EB,而不必 更换已有的凝胶观察、拍照或成像系统(约300nm激发).Gel-Red的激发光谱和发射光谱请参考图1. 图1. Gel-Red的激发光谱和发射光谱 ? Gel-Red的使用方法和EB一致.Gel-Red可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶,也可以在电泳完毕后对凝胶进行染 色.前者更加方便,而后者灵敏度要更高一些.但由于Gel-Red本身已经非常灵敏,通常采用把Gel-Red直接配制在凝胶中 就可以了.对于一些特殊情况,如核酸样品量特别少的情况等,则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色. ? Gel-Red对于核酸的迁移率影响非常小,小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响. ? 通过凝胶回收试剂盒(如碧云天或Qiagen的凝胶回收试剂盒)或酚氯仿抽提,可以有效去除与DNA或RNA结合的Gel-Red,从 而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途. 包装清单: 产品编号 产品名称 包装 D0140 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 1ml ― 说明书 1份2/3D0140 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 400-1683301/800-8283301 碧云天/Beyotime 保存条件: 室温避光保存,至少一年有效. 注意事项: ? 为确保使用的不是假冒的Gel-Red,可以用细胞培养液把Gel-Red稀释至1X,然后对培养的活细胞进行染色.随后在荧光显 微镜下尝试用各种激发光观察,如果发现活细胞细胞核出现明显的荧光,则可以判定为假冒产品.如果各种激发光下活细 胞均无荧光,则说明该核酸染料是不能进入活细胞的高度安全的染料.具有强致突变性的吖啶橙(Acridine Orange)染色核酸 后呈现荧光,但其可以染色活细胞,而Gel-Red不会染色活细胞. ? Gel-Red和EB一样,作为荧光染料均需避光保存,但在使用过程中的常规室内光照不会影响其使用效果. ? 制备好的Gel-Red琼脂糖凝胶,在4?C避光条件下通常可以保存3-5天. ? Gel-Red琼脂糖凝胶再次熔化使用时,为取得更好的观察效果,需要添加适量Gel-Red. ? 电泳之后的凝胶不建议重复使用. ? 电泳后再使用Gel-Red染色的凝胶一般不需要脱色.如果发现背景太高,可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理. ? Gel-Red和Gel-Green除了可以染色双链DNA外,也可染色单链DNA和RNA.Gel-Red对单链核酸的染色灵敏度约为对双链 DNA染色灵敏度的一半.Gel-Red对单链核酸的染色灵敏度约为Gel-Green的5倍. ? 如果使用聚丙烯酰胺凝胶,请使用浸泡染色法染胶,并延长染色时间至30分钟-1小时. ? 如果观察到条带弥散或者分离不理想,建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关.如果浸泡染色法染色后仍然出现 类似的问题,说明与染料无关,请尝试以下方法:使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降 低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等. ? 本产品兼容常用的电泳缓冲液,例如TAE和TBE. ? Gel-Red不属于有毒有害物质,并通过了环境安全相关测试,相关废弃物无需特殊处理,可以参考常规化学试剂进行处理. ? 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内. ? 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作. 使用说明: Gel-Red和EB(溴化乙锭)一样可以根据使用者的偏好或实验目的采用以下方法中的一种: 1. 琼脂糖凝胶中添加Gel-Red. 根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液.在琼脂糖完全融解后,适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时,按照每100毫 升胶液加入10微升Gel-Red的比例(10000:1)加入Gel-Red.混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中.适量的DNA或RNA在该胶中电泳后,在紫外灯下可以观察到明亮的核酸条带. 说明:Gel-Red非常稳定,所以Gel-Red可以像EB一样在琼脂糖凝胶液加热融解后但未凝固前加入并混匀,也可以在琼脂糖 融解前加入,然后再微波炉加热融解并混匀. 2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色. 按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入20-40微升Gel-Red的比例(2500-5000:1)加入Gel-Red,配制成Gel-Red染色液.把 电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中,加入适量上述配制好的Gel-Red染色液,确保至少盖住凝胶.在摇床上缓慢摇动 (约30-50rpm)染色20-30分钟.染色时间根据胶的厚度而定,胶厚则染色时间需要长一些,胶薄则染色时间可以短一些.染 色完毕后,在紫外灯下即可观察核酸条带.要观察到更为清晰的条带,可以在染色后用水漂洗1-2次,每次3-5分钟,以消 除背景,然后在适当紫外灯下或用凝胶成像系统观察.Gel-Red染色液可以重复使用3次左右.Gel-Red染色液也可以一次大 量制备,在室温下避光保存,直至用完.对于核酸需要回收的情况,操作过程中需要注意避免核酸酶污染. 相关产品: 产品编号 产品名称 包装 D0071 DNA上样缓冲液(6X) 2ml D0072 BeyoRed DNA上样缓冲液(6X) 2ml D0128 NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) 1ml D0130 NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) 5ml D0133 NA-Green (EB升级换代产品, 2000X) 1ml D0135 NA-Green (EB升级换代产品, 2000X) 5ml D0139 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 0.2ml D0140 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 1ml D0143 Gel-Green (EB升级换代产品, 10000X) 0.2ml D0145 Gel-Green (EB升级换代产品, 10000X) 1ml ST004L Agarose 50g ST004M Agarose (Low EEO) 50g ST004Q Agarose (Low EEO) 250g ST716 TAE (50X) 500ml ST718 TBE (5X) 500ml 碧云天/Beyotime 400-1683301/800-8283301 D0140 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X)