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中草蒋Chinese Traditional and Herbal Drugs第38卷第6期2007年6月・855・ RP―HPLC法测定桂附地黄丸中芍药苷和丹皮酚 焦少珍1'

2,李宇2,韩凤梅2,陈勇2誊(1.

肇庆学院生物学系,广东肇庆526041;

2.湖北大学中药生物技术省重点实验室,湖北武汉430062) 桂附地黄丸收载于《中国药典>

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2005年版一部, 由肉桂、附子(制)、熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻8味中药组成,具有温补肾阳之功效. 牡丹皮是该方重要组成药材,所含酚性成分有丹皮 酚、牡丹酚苷、牡丹酚原苷,所含萜类和苷类成分有 芍药苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等.桂附地黄丸 中主要活性成分为芍药苷和丹皮酚.而《中国药典》 2005年版一部仅采用HPLC法测定其中丹皮酚的 量.为了完善检测方法,本实验采用RP―HPLC法同 时测定了芍药苷和丹皮酚两种主要活性成分的量. 1仪器和试剂 Agilent 1100型HPLC仪.芍药苷和丹皮酚对 照品购于中国药品生物制品检定所,桂附地黄丸由 北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产,色 谱纯乙腈和甲醇(美国Fisher公司),二次蒸馏水. 2方法和结果 2.1对照品溶液的制备:精密称取芍药苷和丹皮酚 对照品适量,置10 mL量瓶中,各加色谱纯甲醇至 刻度,得对照品溶液储备液,其中芍药苷的质量浓度 为1.075 mg/mL,丹皮酚的质量浓度为1.665 mg/mL.溶液放于4℃冰箱中保存,用时按需稀释. 2.2供试品溶液的制备:将桂附地黄丸剪碎混匀,精 密称取1.0 g,置40 mL离心管中,加甲醇10 mL于 冰水浴中超声提取15 min(功率300 W),离心取上 清液.同法再提取两次.将残渣用5 mL甲醇洗涤,离 心取上清液,同法洗3次,合并上清液,置50 mL量 瓶中,加甲醇至刻度,即得.按药典的处方比例制备缺 牡丹皮、芍药的阴性样品,同法制备阴性对照溶液. 2.3色谱条件:Inertsil ODS C18柱(250 mm*4.6 mm,5弘m);

流动相为乙腈一水系统,使用前超声脱 气30 min,采用梯度洗脱,0~8 min,16%乙腈,8~

25 min,25%乙腈,25 min以后,77%乙腈;

体积流 量:1 mL/min;

柱温:20℃;

检测波长:240 nm;

进样 量:5弘L. 2.4方法专属性:将芍药苷和丹皮酚对照品混合溶 液和桂附地黄丸供试品溶液分别进样分析,见图1. 可见芍药苷和丹皮酚峰达到基线分离,无杂质干扰, 阴性也无干扰.

1 A 2. B . 高;

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5 20

25 0

5 10

15 20

25 t/min 1一芍药苷2一丹皮酚 1-paeoniflorin 2-paeonol 图1对照品溶液(A)、桂附地黄丸(B)和阴性对照(c)的HPLC图Fig.1 HPLC Chromatograms of mixed solution reference substances(A),Guifu Dihuang Pill(B),and negative sample(C) 2.5标准曲线的制备:在上述优化的色谱条件下进 样分析,以浓度质量为纵坐标、峰面积为横坐标,采用Excel的散点图添加趋势线得到回归方程.芍药 苷在2.15~107.50 btg/mL的线性回归方程为y一0.217

3 X+0.300 7,r一0.999 8;

丹皮酚在2.50~ 99.90 ug/mL的线性回归方程为Y=0.164

8 X+ 0.368 4,r=0.999 8. 2.6精密度试验:取同一份桂附地黄丸供试品溶液 连续进样5次,结果芍药苷和丹皮酚峰面积的RSD 分别为0.63%和0.70%. 2.7稳定性试验:取同一份桂附地黄丸供试品溶 液,分别放置0…2

4

6、8 h进样分析,结果芍药苷和 丹皮酚峰面积的RSD分别为0.37%和0.57%. 2.8重现性试验:精密称取桂附地黄丸5份,每份

1 g,制备供试品溶液,进样分析,结果芍药苷和丹皮 酚峰面积的RSD分别为2.69%和2.83%. 2.9加样回收率试验:称取桂附地黄丸样品0.5 g, 制备供试品溶液并进样分析,测定值作为样品本底 值.平行称取桂附地黄丸样品2份,每份0.5 g,其中 一份加入芍药苷409.22弘g和丹皮酚466.2肛g,另 收穑日期:2006―12―12 基金项目:湖北省青年杰出人才科学基金(2002AC004) 作者简介:焦少珍(1969一),女,广东高要人,讲师,硕士,主要从事食品和药品的安全检测研究及教学工作. *通讯作者陈勇E―mail:[email protected] c撬・856・ 中草菊 Chinese Traditional and Herbal Drugs第38卷第6期2007年6月 一份加入芍药苷587.95 btg和丹皮酚699.3,ug,重 复试验3次.进样测定,计算得芍药苷和丹皮酚平均 回收率分别为98.18%、99.33%,RSD分别为 0.63%、0.91%. 2.10样品测定:取桂附地黄丸样品5份,制备供试 品溶液,进样测定,按外标法计算芍药苷和丹皮酚的 质量分数,分别为0.