PDF《中国实验动物学会》

1 中国实验动物学会 团体标准 《实验动物 组织切片免疫组织化学染色方法》 编制说明 联系人:吴旧生 联系

电话:88982310 编制单位:浙江大学动物科学学院 时间:2016 年12 月31 日2中国实验动物学会团体标准 《实验动物 组织切片免疫组织化学染色方法》编制说明

(一) 工作简况:包括任来源、起草单位,协作单位、主要起草人及其所做工作 等;

2015 年6月, 国家标准化管理委员会批准中国实验动物学会作为团体标准试点 单位.

2016 年11 月,经过全国实验动物标准化技术委员会审查同意,由中国实验 动物学会下达《实验动物 组织切片免疫组织化学染色方法》团体标准编制任务.

(二) 主要工作过程、标准主要起草人及其所做的工作 起草单位为浙江大学动物科学学院、协作单位浙江省医学科学院. 主要起草人:吴旧生、刘月环

(三) 标准编写背景 免疫组织化学是利用标记物(荧光素,酶, 重金属离子等)作为示踪剂,通 过免疫亲和(抗原-抗体特异性结合)途径,在组织切片或细胞涂片上,原位显示生 物大分子的一门染色技术.利用抗原、抗体特异性结合的原理,检知组织中某种多 肽、蛋白质等大分子的分布.其基本特点是特异性, 灵敏性,准确性,其结果可实 现形态、 机能、 代谢三个层面的的结合,是日常病理学诊断和研究中的常用手段. 免疫组织化学根据其标记物的不同又包括荧光、同位系、酶等多种,其中又以酶标 抗体最为常用.酶免疫组织化学又可根据标记物标记在一抗或二抗上而分为直接法 和间接法,间接法又有 ABC、LSAB、多聚物法等多种,然后无论如何变化,都是在

3 间接法的基础上进行的. 免疫组织化学它是模型检验、动物病理检测和肿瘤诊断中最常用的方法之一, 但动物种属、材料种类、实验性质、病料本身、抗体来源、实验方法和过程、染色 步骤等种种原因引起染色结果有较大差异,使得染色的结果评价困难,比较的准确 性也大打折扣.因此,染色技术也是病理技术中的重要组成部分,直接影响了临床 诊断, 染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性, 必须按一定的标准程序进行操作, 提高可比性.

(四)标准编制原则;

1. 适用性原则:动物种属、材料种类、实验性质、病料本身、抗体来源、实验 方法和过程、 染色步骤等种种原因引起染色结果有较大差异,在制定指南时留有一定 可变范围,以适应上述复杂的条件. 2.可操作性原则: 根据长期工作的经验和发表的文献,舍弃一些不具有操作性 的方法,仅选择具有普遍性的方法和步骤.

(五)确定标准的主要内容(如指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规 则等)的论据(包括试验、统计数据),修订标准时,应增列新旧标准水平的对比;

1 范围 本标准规定了实验动物组织石蜡切片的免疫组织化学染色方法. 本标准适用于各种实验动物和动物实验组织材料石蜡包埋样本的免疫组织化学 检测.

2 定义 2.1 免疫组织化学:简单地说,用已知的抗原或者抗体去检测待检组织中的抗原或抗体,根据

4 其结合后经一系列方法的处理,呈色反应,在光镜下确定组织的来源属性和部位,对靶抗原进 行定性、定位和定量的技术. 2.2 抗原:它是一类可以刺激机体的免疫系统并促进其发生免疫应答,与免疫应答产物即抗体 和效应细胞,在体内或体外发生特异性结合的物质. 2.3 抗体: 机体的免疫系统受到抗原刺激后,通过机体一系列的化合作用:即体液免疫应答、 B 淋巴细胞活化、增殖、分化为浆细胞,由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的 球蛋白的物质称为抗体. 2.4 抗原修复: 组织在固定脱水等过程中,由于化学试剂的作用封闭了抗原,又由于热的作用致 使部分抗原的肽链发生扭曲交联,致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来,为了解决 上述的问题,利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修 复.