PDF《ELISA 的种类及原理》

4 图2间接 ELISA 原理 夹心 ELISA 夹心 ELISA (Sandwich ELISA) 总体上可以分为两种: 直接夹心 ELISA 和间接夹心 ELISA. 直接夹心 ELISA 直接夹心 ELISA 又分为双抗夹心 ELISA 和双抗原夹 本手册由中国免疫学实验网( www.immuexp.com )转自 Proteintech Group.

5 心ELISA.双抗夹心 ELISA 的方法是:将第一种抗体(捕获抗体)包被在固 相载体上,封闭后加入待检抗原,温育后加入第二种抗体(检测抗体) ,捕获 抗体和检测抗体可以是针对不同表位的两种单抗, 也可以是针对同一抗原的一 种单抗与一种多抗,但是检测抗体需要经过酶标.双抗原夹心 ELISA 的原理 和操作与双抗夹心基本相同,不同的是包被的是抗原,待检对象是抗体,然后 加入酶标抗原,再加底物显色.直接夹心 ELISA 的原理如图 3. 图3直接夹心 ELISA 原理 本手册由中国免疫学实验网( www.immuexp.com )转自 Proteintech Group.

6 对于双抗夹心 ELISA,待检对象必须包括两个或者两个以上的表位,否 则检测抗体无法与待检抗原结合, 例如半抗原和小分子抗原都是不能用双抗夹 心ELISA 检测的.对于双抗原夹心 ELISA,其操作与间接 ELISA 基本相同, 但利用特异性的抗原代替酶标二抗,所以特异性比间接法更好.另外,由于间 接ELISA 中使用的二抗一般只能识别 IgG,而双抗原夹心 ELISA 中任何类似 的免疫球蛋白都可以被检测出,因此双抗原夹心 ELISA 比间接 ELISA 也更灵 敏. 间接夹心 ELISA 间接夹心 ELISA是基于两种不同种属来源的抗体的夹 心ELISA, 其原理是将一种种属来源的特异性抗体包被于固相载体上 (作为捕 获抗体) ,封闭,加入待检抗原,温育,洗涤后加入另一种种属来源的特异性 抗体(非酶标,作为检测抗体) ,最后加入酶标二抗(特异性识别检测抗体) , 再加底物显色. 间接夹心 ELISA 的原理如图 4.与直接双抗夹心 ELISA 相比, 间接夹心 ELISA 中引入了特异性识别检测抗体的酶标二抗,相当于整个体系 的信号增加了一步放大系统, 于是最终的结果比直接双抗夹心 ELISA 更灵敏. 同时,由于间接夹心 ELISA 中的酶标二抗仅能识别检测抗体,而不能识别捕 获抗体,所以体系的特异性也得到了保障.值得提出的是,间接夹心 ELISA 并不是严格要求捕获抗体与检测抗体来源于同一物种, 也可以是这种情形: 仅 用特异性的抗体的 Fab 片段包被固相载体作为捕获抗体, 而用未经处理的同种 属来源的特异性抗体作为检测抗体,酶标二抗选用只针对检测抗体的 Fc 段的 二抗, 这样的酶标二抗同样不能识别捕获抗体, 从而使这种体系里的捕获抗体 与检测抗体起到类似于不同种属来源的效果.间接夹心 ELISA 涉及的体系比 较复杂,用到的试剂也比其它的 ELISA 复杂,但是其检测灵敏度上的优越性 使它在检测那些低丰度抗原的样品中应用得十分广泛. 本手册由中国免疫学实验网( www.immuexp.com )转自 Proteintech Group.

7 图4间接夹心 ELISA 竞争抑制 ELISA 竞争抑制 ELISA 又叫封闭 ELISA,其主要原理是用待检抗原或抗体去 干扰已经预先设计好的体系, 最终显色的结果与待检抗原或抗体的干扰程度成 负相关.竞争抑制 ELISA 灵活性很强,可以在此基础上设计出更复杂的实验 方案,从而派生出所谓的直接竞争抑制 ELISA、间接竞争抑制 ELISA、夹心 竞争 ELISA 等特殊的 ELISA 方法. 这里仅以直接竞争抑制 ELISA 和间接竞争 本手册由中国免疫学实验网( www.immuexp.com )转自 Proteintech Group.