PDF《ASO 使用说明书》

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com ASO 使用说明书 RN:R100093.1 产品简介 反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide, ASO)是指长度为 15~25 个核苷酸的化学修饰 短链核酸,依赖 RNase H Щ庸δ,能够特异性敲降细胞质和细胞核内的 RNA. 锐博生物 ASO 产品是经化学修饰的单链 RNA&

DNA 杂合体,长度为

20 个核苷酸,可用于 细胞实验和动物实验. 运输保存 产品以冻干粉的形式,常温运输.收到产品后,请于-20℃~-80℃保存,冻干粉可以稳定保存 一年.使用前请瞬时离心,用RNase-free Water 配制成 20μM 储存液,分装保存于-20℃ ~-80℃,避免反复冻融(不超过

5 次). 表120μM 储存液的配置参考 ASO

5 nmol

20 nmol RNase-free Water 250ul 1000ul 使用前须知 产品以冻干粉的形式提供,由于影响结晶形态的因素很多,产品外观有些差异,甚至形态无法 用肉眼可见,此为正常现象. 为避免外界因素(包括酶,极端 pH 或者温度条件等)导致产品降解,所有操作请严格遵循 RNA 操作_则.实验过程中,产品最好于冰上放置,使用完毕后请于-20℃~-80℃小心保存. 电话咨询:

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邮箱:[email protected] 细胞实验方法 为了降低细胞密度、试剂用量,转染效率等因素导致的孔间差异保证实验可靠性和重复一 般建议: 1)转染实验中每个转染样品至少设置

3 个复孔;

2)接种细胞时,每孔接种的细胞数量尽量保持一致,且细胞在各孔的表面平均分布. 1. 转染浓度: ASO 最佳工作浓度因丌同的细胞类型及研究目而异.锐博生物推荐的 ASO 初始转染浓度 为50nM,转染后检测时间为 24~72h.最佳转染效率一般通过设置时间梯度和浓度梯度行优 化,优化的范围建议为 5~100nM. 2. 转染步骤: 以riboFECT? CP Reagent 转染 ASO 于24 孔板,转染浓度为 50nM 为例,其他_格容器 的试剂用量请参考表 2,若使用其它转染试剂,请参考对应转染试剂说明书. 1) 接种细胞 a.贴壁细胞:以Hela 细胞为例,接种 1*105 ~5*105 个细胞至含有适量完全培养基的

24 孔板培 养孔中,使转染时的细胞密度能够达到 30~50%. b.悬浮细胞:以THP-1 细胞为例,接种 1*105 ~5*105 个细胞至含有适量完全培养基的

24 孔板 培养孔中. 注:①丌同细胞生长速度丌同,接种细胞的数量,细胞密度需要依据细胞类型,培养时间,实验目而定;

② 每孔接种的细胞数量应尽量相同,使细胞均匀分布;

③由于自身特性问题,悬浮细胞相对较难转染,需要优化 转染条件以便提高转染效果,如果细胞特殊,可更换为电转方式. 2) 转染 对于每个转染样品,请按以下步骤准备: a. 稀释 ASO:用30 μl 1X riboFECT? CP Buffer(v2)稀释 1.25 μl 20μM ASO 储存液(v3), 轻轻混匀. b. 混合液制备:加入 3μl riboFECT? CP Reagent(v4),轻轻吹打混匀,室温孵育 0~15min, 制备成转染复合物. 注: ①请勿振荡,溶液可能会有浑浊,但丌影响转染;

②混合液可室温放置一段时间,但丌宜超过 24h. c. 将riboFECT? CP 转染复合物加入到适量无双抗完全培养基(v1)中,轻轻混匀. 注: riboFECT? CP 转染复合物加入至原细胞培养基中一般无需移除或更换,但亦可依据具体实验情况 行优化 . d. (可选)行其他必要的特殊处理(如加药处理). e. 将培养板置于