PDF《小麦品种贵农 21 抗条锈病基因的 SSR 标记》

704、 温麦

6 号、 温麦

8 号、 京411 和陕

354 均为高感 条锈病菌条中

29、

31、

32 号生理小种的普通小麦品 种(系) .感病对照品种为燕大 1817.

112 抗条锈病成株期鉴定 F2 代分离群体种植于中国农业大学昌平实验 站田间 ,在返青期用扣盆法、 在拔节期用注射法

2 次 以条中

29、

31、

32 号混合接种 ,待感病对照品种燕大

1817 充分发病并大面积传播后 ,对供试材料记载抗 病性 ,分免疫(0) 、 近免疫(0 ;

) 、 高度抗病 (1) 、 中度抗 病(2) 、 中度感病 (3) 、 高度感病 (4)

6 级,并加用 "+ " 、 "- " 表示轻重程度 [8] . 供试小麦条锈菌生理小种由中国农业科学院植 物保护研究所吴立人研究员惠赠.

113 基因组 DNA 提取和抗、 感池构建 小麦基因组 DNA 提取参照 Rogers 和Bendich 的CTAB 抽提法 [9] .从F2 抗感分离群体中选取

10 株 抗病株 DNA、

10 株感病株 DNA ,分别等量混合建立 抗病池和感病池 [10] .

114 SSR引物、 PCR扩增和扩增产物检测 SSR 引物分别根据 R der 等[11] 、 Pestsova 等[12] 、 Eujayl 等[13] 和Song 等[14] 报道的引物序列合成.PCR 反应在 Biometra T1 Thermocycler 上进行.反应体积 为10μ L (含10 * buffer 1μ L ,15 mmolΠ L MgCl2 1μ L ,2 mmolΠ L dNTP 1μ L ,20 ngΠ μ L 引物 1μ L ,1 U Taq 酶,去离子水 31875μ L ,20 ngΠ μ L 基因组 DNA 2μ L) .扩 增程序为

94 ℃变性

3 min ;

94 ℃变性

1 min ,50 ℃、

55 ℃ 或60 ℃ 复性

1 min ,72 ℃ 延伸

2 min ,45 个循环 ;

72 ℃ 延伸

10 min.扩增产物用

5 %变性聚丙烯酰胺 凝胶或

8 %非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,经硝酸银 染色后观察照相.

115 遗传距离估算和连锁分析 用Mapmaker EXP 310b 软件计算标记与抗条锈 病基因之间的遗传距离 ,利用 K osambi 函数将重组

8 6

8 1 作物学报第32 卷 率转化为遗传图距 (cM) 构建该基因的分子标记连 锁图谱.

116 基因的染色体定位 根据 Sourdille 等[15] 报道的小麦微卫星标记缺失 系物理定位结果 ,结合现已发表的小麦微卫星标记 遗传图谱 [11 ,14] ,对与抗病基因连锁的标记位点进行 染色体或染色体臂定位 ,从而确定基因的染色体 位置.

2 结果与分析

211 抗性鉴定和遗传分析 田间成株期鉴定结果表明 ,在94 株中 ,69 株抗 病(均为

0 级) ,25 株感病(均为

4 级) .经卡方测验 ,

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