PDF《中华人民共和国国家环境保护标准》

4 方法原理 使用

24 孔细胞培养板,在板对照、阴性对照和阳性对照控制的条件下,将4~128-细胞 期的斑马鱼受精卵置于不同稀释倍数的水样中,在26 ° C±

1 ° C 的条件下培养

48 h,根据鱼 卵存活与死亡的统计数据求出 LID 或LC50 值,表征水样的急性毒性.

5 干扰和消除 水样浊度或色度干扰测试终点判断, 可用塑料滴管 (7.11) 缓慢从

24 孔细胞培养板 (7.8) 中吸出一定量的水样后再行观察,避免触碰鱼卵;

观察结束后,若需继续暴露,则用塑料滴 管(7.11)将原水样移回,恢复原有暴露体积.

6 试剂和材料 6.1 受试生物 6.1.1 种鱼 正常野生型斑马鱼 (Danio rerio) 呈银白色带蓝色水平条纹, 成鱼体长可达 3.5 cm 左右. 使用健壮、无疾病、无畸形、产卵量及受精率高的野生型斑马鱼作为种鱼用于产卵,鱼龄在 6~24 月之间.健康雌鱼腹部银亮,饱满膨大.健康雄鱼体型修长,腹部扁平,身体带有金 黄色光泽. 种鱼在产卵前

6 个月不予使用任何药物. 种鱼驯养及维持具体条件及方法见附录 B. 6.1.2 鱼卵 受精率≥70%,处于 4-~128-细胞期(见附录 A) . 6.2 试剂 除非另有说明, 分析时使用符合国家标准的分析纯试剂. 试验用水使用新制蒸馏水或去 离子水,满足 pH 值6.5~8.5,电导率10%) 是否试验人员_复核人员_审核人员_

17 F.2 斑马鱼卵暴露试验镜检结果记录表

24 孔 细胞 培养 板 水样稀释倍数/ 水样稀释浓度/ 阴、阳性对照 暴露 时间 测试效应 (卵凝结、体节未形成、∞尾部未分离、* 无心跳) 存活率 /死亡 率(%) 板对照 水样

1 D= (或水样百分 比浓度或阴、 阳性对照)

24 h A1 A2 A3 A4 A5 A6 B1 B2 B3 B4 B5 B6

48 h A1 A2 A3 A4 A5 A6 B1 B2 B3 B4 B5 B6 D= (或水样百分 比浓度或阴、 阳性对照)

24 h C1 C2 C3 C4 C5 C6 D1 D2 D3 D4 D5 D6

48 h C1 C2 C3 C4 C5 C6 D1 D2 D3 D4 D5 D6 …… ……

24 h A1 A2 A3 A4 A5 A6 B1 B2 B3 B4 B5 B6

48 h A1 A2 A3 A4 A5 A6 B1 B2 B3 B4 B5 B6 ……

24 h C1 C2 C3 C4 C5 C6 D1 D2 D3 D4 D5 D6

48 h C1 C2 C3 C4 C5 C6 D1 D2 D3 D4 D5 D6 …… ……

24 h A1 A2 A3 A4 A5 A6 B1 B2 B3 B4 B5 B6

48 h A1 A2 A3 A4 A5 A6 B1 B2 B3 B4 B5 B6 ……

24 h C1 C2 C3 C4 C5 C6 D1 D2 D3 D4 D5 D6

48 h C1 C2 C3 C4 C5 C6 D1 D2 D3 D4 D5 D6 备注 试验人员_复核人员_审核人员_

18 附录 G (资料性附录) 寇式法计算 LC50 G.1 LC50 计算 寇式法计算 LC50 要满足下列条件: a)每个稀释水样浓度实验组的动物数要相同;

b)各实验组稀释水样浓度要按等比级数分组;

c) 稀释水样最大浓度的死亡率最好为 100%或与之接近, 稀释水样最小浓度的死亡率最 好为 0%或与之接近. 计算公式如下: (G.1) 式中:Xk 为参与计算的稀释水样最大浓度的对数值;

d 为稀释水样相邻浓度比值的对数或相邻两组浓度的对数差;

pi 为参与计算的各稀释水样浓度组的死亡率(以小数表示) ;

pm 为参与计算的最大稀释水样浓度组的死亡率(以小数表示) ,Pm≤1,当试验 数据中最高浓度组及其相邻的多个高浓度组的死亡率等于

1 时, 仅以其中最小浓度者 参与计算;

pu 为参与计算的最小稀释水样浓度组的死亡率(以小数表示) ,Pu≥0,当试验数 据中最低浓度组及其相邻的多个低浓度组的死亡率等于

0 时, 仅以其中最大浓度者参 与计算. 案例:某工业废水对斑马鱼卵

48 h 急性毒性试验数据如表 G.1 所示,求48 h LC50. 表G.1 斑马鱼卵急性毒性试验数据 废水稀释水样浓度 (体积百分比)(%) 稀释水样各浓度组 实验鱼卵数(个) 死亡数(个) 死亡率(%) 10.0