PDF《958年创刊 2》

3 . B g l Ⅱ和BamHⅠ酶切鉴定结果. 图1SPOct4- p A c G F P 1- N 1的PCR鉴定及双酶切鉴定 F i g .

1 T h ei d e n t i f i c a t i o nr e s u l t s o f p l a s mi dS P O c t 4- p A c G F P 1- N 1b yP C Ra n dd o u b l ee n z y med i g e s t i o n 小鼠胚胎成纤维细胞和绵羊胚胎成纤维细胞均未观 察到绿色 荧光蛋白的表达(见291页 彩图2B和

2 D ) .

2 .

3 .

2 小鼠胚胎干细胞中的表达活性 将SPOct4-pAcGFP1- N 1质粒转染到小鼠胚胎干细胞中, 并 在转染后

4 8小时, 在倒置荧光显微镜下观察表达绿 色荧光蛋白的情况, 结果表明, 在克隆状生长状态下 的小鼠胚胎干细胞中观察到表达绿色荧光蛋白细胞 ( 见291页彩图

3 ) .

2 .

4 绵羊 O c t 4基因启动子在胚胎中的表达活性检 测结果 使用 S P O c t 4- p A c G F P 1- N 1质粒对小鼠原核期 胚胎( 共16枚) 进行转染, 每隔

2 4h 对胚胎细胞中绿 色荧光蛋白的表达情况进行观察, 结果表明: 转染

2 4小时后,

1 6个胚胎中有 3个可观察到微弱荧光;

转染3 6~

4 8h后, 荧光强度逐渐增强;

转染

7 2小时后 ( 囊胚期) , 9个胚胎内细胞团出现明显的绿色荧光, 而其滋养层细胞中未观察到绿色荧光( 见291页彩 图4).3讨论

2 0

0 6年K.Yamanaka等[

1 1 ] 首次利用 4个因子 O S K M( O c t

4 、 S o x

2 、 K l f

4 、 c -M y c ) 将小鼠成纤维细胞 诱导成为多能干细胞( i n d u c e dp l u r i p o t e n t s t e m c e l l , i P S ) .而后 J . Y u等[

1 2 ] 利用 O S N L ( O c t

4 、 S o x

2 、 N a n o g 和Lin28)4个因子将人的体细胞诱导为具有多向分 化潜能的 i P S细胞, 这两组诱导因子中都包含 了Oct4,表明 O c t 4在诱导重编程中发挥着重要作用. 作为一种重要的转录因子以及诱导 i P S的主要 因子之一, O c t 4是由 P O U

5 f 1编码, 属于 P O U ( P i t - O c t - U n c ) 转录因子家族成员.O c t 4主要表达于受 精卵、 囊胚内细胞团、 原始生殖细胞、 体外培养的 E S 细胞、 胚胎生殖细胞和胚胎癌细胞等未分化或分化程 度较低的组织细胞中, 在已分化的细胞及成体组织中 的表达量非常低.研究结果表明, 敲除 O c t 4基因时, ・

3 ・ 总第

5 1 1期 小鼠胚胎不能形成内细胞团, 导致胚胎不能正常着床 而使得发育终止[

1 3 -

1 4 ] , 说明 O c t 4基因是胚胎发育早 期过程中形成多能性细胞所必不可少的.而体外研 究发现, 只有 O c t 4基因表达水平维持在一定范围时, E S 细胞才能够保持其未分化状态, 并维持自我更新;

O c t 4基因表达水平高于正常水平 2倍时, E S细胞会 向原始内胚层和中胚层方向分化;

而当其表达水平低 于正常水平一半以下时, 则导致 E S细胞向滋养层和 原始内胚层分化[

1 5 -

1 6 ] . 小鼠、 人和猪等的 O c t 4基因已被成功克隆, 并已 利用相应 O c t 4因子相继建立起了获得 i P S的方法. 但迄今为止, 尚未见到有关绵羊 O c t 4基因的相关研 究报道.已知获得的绵羊 i P S , 主要是利用其他物种 来源的异源因子诱导绵羊体细胞而产生[

1 7 -

1 8 ] .为了 便于观察判断体细胞是否发生完全........