PDF《洋葱大葱种问杂种鉴定方法建立与应用》

659 亲本大葱和洋葱及其杂种F.扩增的ITS保守序列, 结果显示m相同大小(约0.8kb)的尊~条带(图l ―A).对其PCR扩增产物用限制性内切酶DdeI酶 切以后,大葱酶切产物大小与原来相同,而洋葱ITS 保守区域被Ddel酶酶切成2条大小不同的单一条 带,一条约为0.6kb,另一条约为0.2 kb.大葱和洋 葱的杂种植株的核糖体ITS区域PCR产物被DdeI 900bp 700bp 酶切为3条带,其中1条带与大葱相同,另2条与洋 葱相同(图1一B).由此根据两亲本ITS保守区域 酶切的差异片段可以判定大葱和洋葱染色体是否遗 传到杂种F..用此方法对4份杂种F.植株ITS保 守区域进行扩增,随后用DdeI酶切,结果表明洋葱 与大葱种间杂种F,其细胞核基因组都含有两亲本 的基因组(图l―B). 900bp 700bp 300bp 图1 大葱、洋葱及其F.的ITS鉴定 Fig.1 ITS identification of A.fistulosum,A.cepa and their Fl hybrids A中M:DNA Marker;

l:大葱;

2:洋葱;

3~6:杂交晶种B中M:DNA Marker;

1:人葱;

2:洋葱;

3:大葱酶切产物;

4:洋葱酶切产物;

5~8:杂交品种酶切产物 A:M:DNA Marker;

1:A.知tulosum;

2:A.cepa;

3―6:Hybrids B:M:DNA Marker;

I.^.A伍tulosum;

2:A.cepa 3:Digestion produe!s of A.肛tulosum;

4:Digestion products of A.eepa;

5―8:Dde T digestion results of Hybrids¨S PCR products 2.2 洋葱、大葱及其F.的细胞质鉴定 首先,在1.5%的琼脂糖凝胶图上分析,F.杂种细 胞质线粒体srRNA基因V7区域的扩增产生与两亲 本物种大小(约0.5kb)相同的单一条带(图2一A). PCR产物用限制性内切酶RsaI酶切后,不同的酶切 片段模式可以用来区别大葱与洋葱之问的线粒体基因 型,大葱亲本显示一条约0.3kb大小的条带,比洋葱的 条带稍小(0.32kb),且两物种都有另外一条小的片段, 约0.1kb(图2一B).根据两亲本线粒体srRNA基因 v7区域不同的酶切片段结果,可以鉴定大葱和洋葱种 间杂种的线粒体类型,从而判定其F,杂种的母本.用 这种方法对4份洋葱与大葱杂种F.的线粒体srRNA基因V7区域的扩增,随后进行RsaI酶切,结果表明这4 份杂种F.的母本都是大葱(图2一B). 300bp 100bp 图2 大葱、洋葱及其F.的mtDNA V7鉴定 Fig.2 mtDNA V7 identification of A.........