PDF《重望生 堕童》

1 细 胞长 成 单层后 , 感染重组病 毒 .病 变后,刮下 细胞离心浓 缩,车文于1995年 3月I1・比到. 6月 6日修 回 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 1期 吴雷等:一株新 的狂犬 病重 组痘 苗病 毒 某些 生物 学性 酿的 研究35点样 于玻 片上 , 干燥 , 丙酮 固定 . 间接免 疫荧 光 染色 .取 细胞裂 解液,SDS-PAGE电泳, 转膜染色,We s t e r n b l o t 方法详 见文 献.7Southernblol提取 重 组病 毒及 天坛 株DNA … . Hi n dⅢ 酶切,07%琼脂 糖凝胶电羽 ( 过夜,变性、中和 、 转 膜采 甩DN A从琼脂糖凝胶同时 向两 十 固体 转移的方法 .后与a.北P d C TP标记的RG基因及M基因( 米自p69LacS-1质 粒) 探针进行 杂交 , 在双面 增感 屏 中放 X光片70 C曝光

4 d .

8 l

1 启动 子 与部 分RG基因 序列 的克隆 及测 定克隆出RG基 因及其 启 动子 于pucl8质粒 上亚克隆部 分RG基 因和 P . . 启 动子 于pGEM3 z f ( 一) 质粒 上.双脱氧法质粒 测序.P l反 向引物 , 用Pharma c i a L KB测 序仪 . 方法 见文 献J.结果12繁殖特性殛温度稳定 性 重组病 毒VVMI l KR G株比VVT KI

1 KRG株在鸡胚细胞和 C V 1细胞中繁 殖能力略 高 .两 种重组病毒在鸡胚细胞中繁 殖能力第三天达到最高,CV一1细咆中则第二天达到最高 .如图1.用

5 %蛋 白脲分别 将重 组病 毒和天坛株稀释 至10PFU/ ml , 分 装小管 , 各置

3 7 C、 室温(

2 2 C) 和4 17若干天后 一2

0 ℃保存, 每个温 度组 标本收 齐后 立 即做 空 斑滴定 .如表

1 .三 种温度下经过 一段 时间后病 毒滴 度都 有 一定下 降,但重 组病 毒 的下 降程 度与天坛株无明显 差别.图1重组病 毒在 ( a ) l细胞 ( h ) 鸡胚 细胞 不同时问 的增 殖 曲线 F i g

1 Th e C U ~ - e o f g r o wt h i n ( a )C V

1 c d l( b )c h i c k e n e mb r y o c e l l i n d i f f e ~n t t i me

2 重组病毒的毒力 家 兔皮 内注 射后 4天的皮肤红 肿反 应结果 见表

2 .天坛株 引起 皮肤 红 肿反应所需的病 毒量 明显少于重组 病毒.这说明 w MI I KR G株在 家兔皮 内毒 力略 高于 以前 构建的VVTK. KR G 株.3狂犬病毒糖 蛋 白表达 的检 定 糖蛋 白在细胞膜上表达 , 与 荧光抗体结合后 在荧 光显微镜 下 出现荧光物质( 图2a).S DS ―P AGE电泳转膜 , 与糖蛋 白单抗特异性 反应, 显色后 重组病 毒在

6 7

0 0

0 D a处有一 明显的狂犬稍 毒糖蛋 白带 ( 图2b):维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病毒学第l1卷衰1重组龠 毒在不 同温度 下的稳 定性 Ta b

1 Th e s t a b di t y o f r ~ mb i r t a n t v a c c i n i a v i r us a t di f fe r e at t e mpe r a t ~ e s 衰2重组病 毒 与痘 苗病毒 在寒鱼 皮 内毒 力 的比 较Ta b

2 Co mp a r i s on t h e i nt r a d e r ma l r u 】 ㈣ f r e c o mbi n~ t v i r u s a n d v a c c i r t i a v i r u s i n r a b b i t s f Di a me t e r s o f d e r ma l l e s i o n …i Ⅲ VVI K I

1 KRG

0 6

0 4

0 2

0 0

0 0 VVM

1 I KRG

0 8

0 6

0 6

0 4

0 2

0 0 V a e c i n i a V i r u s 未测未测0+8070605*痘苗病 毒天 坛株 V a c c i n i a V i r 眦(Ti㈣t a n t r a i n )

1 .: J

0 0 - ! )a'

3 图2a问接 免疫荧 光结果 b We s t e r n b l o t 结粜1分子 量标 准2VVMI I KR G株r蠢4维普资讯 http://www.cqvip.com 第 1期 吴 雷等 : 一株 新 的狂犬病 重 组痘 苗病 毒某 些 生物 学性 质的研 究、ⅥKl

1 KR G株4痘苗 天坛 株[FA of t h e r e c o m b i n a nt v a c e i n i a vi r u . ~VVM