PDF《重望生 堕童》

1 1 KRG i n c t e d CV.

1 c e l i W e s t e r n b l ot o f t he r e c o mbi n~ t v a c e i ~i a v i r u s V VM

11 KRG ― I n c t e d c e U (

1 )T n

0 I e c u l a r we i g [ ~ tⅡ L a r k 盯(2VVM

1 I KRG s t r a i n ( 3)VVTKI

1 KR G s t r a i n (

4 )v a c c h ~ i a v i r u ( Ti a n t a n s t r a l n )

4 S o u t h e r n b l o t 放射 自显影结 果图 3可见, 重组病毒 W M1

1 KR G株DNA与M基因和 RG 基因探针杂交, M片 段消失, . 代之以4 .

1 k b 片段, 而天坛株D N A与G基因 探针杂交不出现反 应,表明RG基因插 入到天坛株Hi n d m M 片段中.VmTl23q栅j一

231 30

9 d l

6 ―

655 7

4 3 l

3 22

2 027 c[ I l I 图3Southernblot检捌狂犬 病毒 G 基因存在 及其 在重组痘 苗 前毒 DNA中的位 置23为痘苗 病毒 M 基 因探 针杂交结 果i56为狂犬 病毒 G基 因探针 杂 交结 果;

14为DNA分 子量 标准 .

2 5 重组病 毒VVM1

1 KRG株;

36痘苗病 毒天坛 株Vm4T56_―-

3 Fi g

3 I d e nt i f i e d RG g… d] o c a t i o n b y S ou t h e r n b l o t h y b r i dI z a t L o n

2 3 h r i d i z a t l oa wi t h Q -

32 p - M DNA p r ob e

5 6 h r i d i z a t i on wi t h n -

32 p - G DNA p r o b e l

4 n m i e c u L a r we i g ht ma r k e r

2 5 r e ∞m n a n【v a e c i n i a v i ru s( VVM I I KRG s t r a l n )

3 6 v a c c i ni a v i r u s( Ti a nL a n s t r a i n)

5 P

1 【 启动子与糖蛋 白基 因间隔序 列分 析DNA克隆、 亚 克隆酶 切鉴 定结果 如图4.间隔序 列测定结果如下:5GGGA T CC TCT A GAAG CGATG CTACA CTAGT CACAA TCACC Xb a I ACTTT CATA T TTACA ATATA TGG TA AAAAT TTC AT m GT 兀TTCTAT G CTA T AA A TG Oc1 ℃ G AGATC CCC AT CGAAT Tc GGG C A ― T ― GG TC1v r T TG1v r T GTA CT CCTTC TGC A;

T TTTTC A

6 AATTC TToCT GTTGT AGAAT C TAG G CAGGT GTTTC

3 a b

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3 8 中国病毒学第11卷 T 从.ATG为痘苗病毒转录起始特殊序列, T 从 之前为 P l l 晚期启动子.T A G 为翻译蜂止 密码子,T从 与ATG 之间为间隔序列.囝4克隆(a)及亚克隆(b)酶切鉴定结果Fig4Ekct∞口 h . r … o f目donude a s e r e s t r i c t i o n o f d o n e~ mi d s ( a )a n d s u b d o n e~ ml d s( b 作 为基 因工程疫苗的研究.了解 以痘 苗病毒为载体,外源基因插 入后对痘苗病 毒生物学性质的影响是 很重要的.较多学 者是利用痘苗病毒的胸 腺核苷激 酶(TK) 区插 入外源基因.而我们研究的重组 痘 苗病毒是将狂犬病毒糖蛋 白基 因插 入到痘 苗病毒 另一个非 必需 区- - Hi n dⅢ M 片段 .根据 我 们的研 究结 果来 看, 该 重组病毒 有 良好的 繁殖、 温 度稳定性和 表达 糖蛋 白的能 力,较好 的中和 抗体诱导能 力和 对CVS株........