PPT《高压液相技术》

高压液相技术 上海交通大学医学院李莉 讲师

第三章 高效液相色谱法

第一节 概述高效液相色谱法是继气相色谱之后,70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术.

高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的.现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别.不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自动化 操作.经典的液相色谱法,流动相在常压下输送,所用的固定相柱效低,分析周期长.而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9?107Pa);

色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);

同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流

第一节 概述出物进行连续检测.因此,高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点.所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法.

二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样,液相色谱分离系统也由两相――固定相和流动相组成.液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相(或在惰性载体表面涂上一层液膜)、离子交换树脂或多孔性凝胶;

流动相是各种溶剂.被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱.根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离.色谱分离的实质是样品分子(以下称溶质)与溶

第一节 概述剂(即流动相或洗脱液)以及固定相分子间的作用,作用力的大小,决定色谱过程的保留行为. 根据分离机制不同,液相色谱可分为:液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型.

三、液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱所用基本概念:保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致.液相色谱所用基本理论:塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致.但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相,而液体和

第一节 概述气体的性质不相同;

此外,液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同,所以,液相色谱与气相色谱有一定差别,主要有以下几方面:(1)应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质.对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难.致使其应用受到一定程度的限制,据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析;

而液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制,它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析,大约占有机物的70 ~ 80%.

第一节 概述(2)液相色谱能完成难度较高的分离工作 因为: ①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的,不参与分配平衡过程,与样品分子无亲和作用,样品分子只与固定相相互作用.而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子,为提高选择性增加了一个因素.也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相,增大分离的选择性. ②液相色谱固定相类型多,如离子交换色谱和排阻色谱.

第一节 概述等,作为分析时选择余地大;