DOC《大鼠α颗粒膜蛋白（GMP-140）试剂盒使用方法》

大鼠α颗粒膜蛋白(GMP-140)试剂盒使用方法 检测范围:48T 0.

5μg/L -20μg/L 使用目的: 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本α颗粒膜蛋白(GMP-140)含量. 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠α颗粒膜蛋白(GMP-140)水平.用纯化的大鼠α颗粒膜蛋白(GMP-140)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入α颗粒膜蛋白(GMP-140),再与HRP标记的α颗粒膜蛋白(GMP-140)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的α颗粒膜蛋白(GMP-140)呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠α颗粒膜蛋白(GMP-140)浓度. 试剂盒组成

1 20倍浓缩洗涤液 20ml*1瓶7终止液 3ml*1瓶2酶标试剂 3ml*1瓶8标准品(40μg/L) 0.5ml*1瓶3酶标包被板 12孔*4条9标准品稀释液 1.5ml*1瓶4样品稀释液 3ml*1瓶10 说明书 1份5显色剂A液3ml*1瓶11 封板膜 2张6显色剂B液3ml*1/瓶12 密封袋 1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性. 操作步骤 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列

图表在小试管中进行稀释. 20μg/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 10μg/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 5μg/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 2.5μg/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 1.25μg/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔.在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍).加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外. 温育:操作同3. 洗涤:操作同5. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色). 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值). 测定应在加终止液后15分钟以内进行. 操作程序总结: 计算 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;

再乘以稀释倍数;

或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度. 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存. 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果. 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔.如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(*n*5). 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染. 6.底物请避光保存. 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理. 9.本试剂不同批号组分不得混用. 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准. 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;