DOC《ELISA中常见问题及解决方法》

ELISA中常见问题及解决方法 ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛 的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注 意,有可能导致显色不全、花板等结果.

我公司将操作中各个环节 常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启 发,提高试验质量. 下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决 办法

1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前 将试剂在室温下平衡30-60分钟.

2 加样 可能原因: a. 血清或血浆标本分离不好即进行加样;

b. 手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特 别是室内温度较高时);

c. 加完标本再加酶试剂时酶液溅出孔外. 解决办法: a. 标本为血清:最好将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp 离心15分钟;

标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集 管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10T,放置一段时间 后,3000rpm离心15分钟;

若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱 中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内. b. 加样后及时放入孵箱. c. 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干. d. 如果采用AT或其他全自动加样,最好选择FAME或其他后处理仪 器加酶试剂. e. 标本较多时,请分批操作.

3 孵育 可能原因: a. 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难 于清洗彻底;

b. 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以 清洗彻底. 解决办法: a. 贴封片或加盖;

b. 按说明步骤严格控制操作时间.

4 洗板 可能原因: a. 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉. b. 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;

洗板 针堵塞,抽吸不完全;

洗板不畅,导致洗板效果差. c. 反应板过多造成洗板等待时间长. 解决办法: a. 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后最好在吸水纸(选择 干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;

b. 合理安排,或多用几台洗板机.

5 显色 可能原因: a. 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;

b. 加显色剂时溅出孔外造成液体回流. 解决办法: a. 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅 蓝色的TMB显色剂不用;

b. 加样时保持显色剂不外流;

c. A、B液应避免接触金属器械.

6 终止 可能原因: 如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加.所以在加终止液时 应避免产生气泡.

7 读板 如读板时板底不清洁等.应保证酶标板清洁. 所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;

尽可能实现ELISA 检测标准自动化,有效提高检测质量. 在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行 操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一 份标本,才能保证检测质量.现在国内已有相当数量的单位拥有全 自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了 重要作用.