DOC《现货销售人内皮抑素ELISA检测试剂盒说明书》

现货销售人内皮抑素ELISA检测试剂盒说明书 试验原理: ES试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).

已知ES浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测.先将ES和生物素标记的抗体同时温育.人内皮抑素ELISA检测试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP.再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用.产生颜色.颜色的深浅和样品中ES的浓度呈比例关系. 自备材料 1.蒸馏水. 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、

200、500ul、1000ul. 3.振荡器及磁力搅拌器等. 安全性 1.避免直接接触终止液和底物A、B.一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗. 2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品. 3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份. 操作注意事项 1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温.稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存. 2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质. 3.不用的其它试剂应包装好或盖好.不同批号的试剂不要混用.保质前使用. 4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器. 5.使用干净的塑料容器配置洗涤液.使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品. 6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水. 7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子.底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下.避免用手接触,有毒.实验完成后应立即读取OD值. 8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样. 9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作. 样品收集、处理及保存方法

1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激.使用不含热原和内毒素的试管.收集血液后,1000*g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离.

2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测.1000*g离心30分钟去除颗粒.

3、细胞上清液---1000*g离心10分钟去除颗粒和聚合物.

4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,人内皮抑素ELISA检测试剂盒避免反复冷冻.尽可能的不要使用溶血或高血脂血.如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤.不要在37℃或更高的温度加热解冻.应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻. 试剂的准备 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存.稀释前将标准品振荡混匀. 2.洗涤缓冲液(50*)的稀释:蒸馏水50倍稀释. 操作步骤 1.使用前,将所有试剂充分混匀.不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差. 2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数.每个标准品和空白孔建议做复孔.每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔. 3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内.立即加入50ul的生物素标记的抗体.盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时. 4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次. 5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟. 6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次. 7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟.避免光照. 8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果. 9.在450nm波长处测定各孔的OD值. 局限 6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果. 试剂盒性能 1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品.稀释度的线性.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990. 2. 特异性:不与其它细胞因子反应. 3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%. 结果判断与分析