DOC《南京师范大学》

第二章 白玉菇多糖提取方法的比较及其优化 2.1材料与方法 2.1.1材料与试剂 白玉菇:购于南京市上海路菜市场. 葡萄糖(105 ℃干燥至恒重)、苯酚、浓硫酸、氢氧化钠、95%乙醇(均为国产分析纯),上海久亿化学试剂有限公司南京分公司. 2.1.2仪器与设备 FM100 高速万能粉碎机 天津太斯特仪器有限公司;

DHG-9140 电热恒温鼓风干燥箱 上海精宏实验设备有限公司;

HH-6 数显恒温水浴锅 常州国华电器有限公司;

RE-52A 旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂;

LD5-10 低速离心机 北京医用离心机厂;

JA5003N 电子天平 上海精密科学仪器有限公司;

KQ-300B 超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司;

VIP271 微波炉 顺德惠尔浦蚬华微波制品有限公司. 2.1.3实验方法 2.1.3.1热水浸提法 新鲜的白玉菇洗净后,60℃低温烘干,粉碎后过100目筛.精确称量5g,按液料比20:1加入蒸馏水,在90℃恒温水浴中浸提3h,抽滤,滤渣反复提取2次,合并滤液.滤液旋转蒸发浓缩至原体积的1/4后,加入95%乙醇沉淀多糖,放置于4℃冰箱过夜,离心,取沉淀.沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤两次,低温干燥得白玉菇多糖[].平行实验3次,下同. 2.1.3.2 超声波辅助提取法 精确称取白玉菇粉末5g,按液料比20:1加入蒸馏水,放入超声波清洗器中,功率350W,20min,然后放入90℃恒温水浴中浸提2h,然后按1.3.1中(抽滤、浓缩、醇沉、洗涤、干燥)操作得白玉菇多糖. 2.1.3.3 微波辅助提取法 精确称取白玉菇粉末5g,按液料比20:1加入蒸馏水,放入微波炉中,功率350W,20min,然后放入90℃恒温水浴中浸提2h,按1.3.1中(抽滤、浓缩、醇沉、洗涤、干燥)操作得白玉菇多糖. 2.1.3.4 碱液提取法 精确称取白玉菇粉末5g,按液料比20:1加入0.75mol/L NaOH 溶液,然后放入90℃恒温水浴中浸提3h,然后按1.3.1中(抽滤、浓缩、醇沉、洗涤、干燥)操作得白玉菇多糖. 2.1.3.5 多糖含量的测定 2.1.3.5.1标准曲线的绘制 白玉菇多糖含量测定采用苯酚-硫酸法[].准确称取105℃烘干至恒重的标准葡萄糖10mg于100mL容量瓶中并摇匀,分别取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1mL葡萄糖标准溶液,分别加蒸馏水补至1.0mL,加5%苯酚溶液2.5mL混匀,迅速加入5.0mL浓硫酸混匀,沸水浴15min.在490nm处测定吸光度.以葡萄糖质量浓度(x)为横坐标、吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线. 2.1.2.5.2 样品多糖浓度的测定 分别精确称取四种方法提取的白玉菇多糖100mg,以蒸馏水定容至100mL容量瓶中,摇匀.吸取该溶液10mL于100ml容量瓶中,蒸馏水定容,摇匀,即得样品待测液. 分别吸取上述待测液1.0 mL,按1.3.5.1中苯酚-硫酸法进行操作,测定样品在490nm处的吸光度值.将测定的吸光度值代入回归方程计算出样品液中多糖浓度. 2.1.3.6 白玉菇多糖得率的计算 白玉菇多糖得率=*100% 四种方法得到的得率用DPS软件V9.50处理[]. 2.1.3.7 响应面法优化白玉菇多糖提取工艺 在四种方法的基础上,超声波辅助法提取多糖的得率最高,与其他三个方法比较有显著差异.应用Design Expert 7.0.0软件[-],根据Box-Beknhen 中心组合实验设计原理,以多糖得率Y(%)为响应值,设计三因素三水平响应面分析实验,优化白玉菇多糖的提取条件.实验因素及水平见下表. 表2-1 响应面分析因子及水平 Table 2-1 Factors and levels of the response surface 水平 因素 超声时间 A/ min 液料比B 浸提温度C /℃ -1