DOC《大鼠FN受体（FNR）》

大鼠FN受体(FNR) 该试剂盒以 HRP标记的链霉亲和素复合物(HRP Streptavidin Conjugate, HRP-SA)为基础,可用于检测大鼠子宫及相 FN受体(FNR)抗 、特异性强、定性定位 、背景清晰.

在所用的 FN 受体(FNR)一抗与相应靶抗原 ,用生物化二抗与一抗特异性 ,最原.该试剂盒 后加 HRP-SA,形成抗原―特异一抗―生物素化二抗―HRP-SA复合物,显微镜 下观察成像. 试剂盒所含试剂: 试剂A 通透液:0.1% Triton-X

100 10 mL(选用) 试剂B 封闭 试剂C (原装进口分装)已稀释的即用型FN受体(FNR)一抗(2.5ml) 试剂D (原装进口分装)生物素化 IgG 1支 (浓度1.5 mg/mL,稀释 1:300~1:500)50 μL+抗体稀释液20ml (封闭用)

20 mL 试剂E HRP-SA复合物1支(浓度1 μM,稀释 1:50~1:200)100 μL 试剂F DAB显色液 5ml 用户自备试剂: 1. 10mM TBS(pH7.2~7.4) 三1.21g 7.6g 加蒸馏 800mL,浓盐酸调pH值至7.2~7.4,最后定容至1000mL TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%体积 ) 2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液) 10mM pH6.0 柠檬酸 柠檬酸0.38g 柠檬酸三钠2.45g 加蒸馏 900mL,浓盐酸调pH值至6.0,最后定容至1000mL 或:0.5M EDTA修复液(pH8.0) EDTA・2H2O 186.1g 加蒸馏 700mL,用10mM NaOH调pH值至8.0,最后定容至1000Ml 3.

10 mL 4. Tween

20 5 mL 石蜡包埋组织切片 实验步骤(建议方案): 石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度 1.烤片: 将待做切片 ,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr;

的容器中脱蜡3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次 2.脱蜡: 切片放

10 min;

3. : 切片经下行酒精 ,无 乙醇2 min;

75%乙醇2min,自来 5min,95%乙醇2次(每次2min),85% ,ddH2O洗2*2min;

4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温 度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然 ,自来 2min,TBS洗涤(2*2min)( 5步封闭. 5.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育30 min;

,ddH2O洗2* 1)* 注:有些抗原勿需修复, 直接进 6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜;

7.洗涤: TBS-T洗涤(3*5 min);

8.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育10 min;

9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育

30 min;

10.洗涤: TBS-T洗涤(3*5 min);

11.封闭: 滴加试剂Tween 20,37℃湿盒孵育封闭20 min;

12.加HRP-SA: 滴加用试剂C稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20 nM),37 ℃湿盒中孵育30 min;

13.洗涤: TBS-T洗涤(3*5 min),TBS洗涤(2*5 min);

14.显色:应用DAB溶液(试剂F)显色;

15.复染:自来 ,复染,脱 ,透明;

16.封片: 待组织标本干后,用试剂 17.观察成像: 显微镜下观察成像. 封片;

注意事项: 1. 修复后 ,自来 ,骤. 2. ,用过的柠檬酸 用. 3. 若试剂为微量浓 ,用前应低速离心,将.4. 封片前一定要换用TBS ,以便洗去组织上残留的Tween 20,否则会 影响 . 5. 如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封 片. 附1: 抗原修复方法 常用抗原修复液:柠檬酸 9.0)等等. (0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修复液(pH8.0 或 ,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育

一、酶消化修复法 切片脱蜡 ,TBS 20~30min后TBS .

二、微波抗原修复法 微波盒中加 抗原修复液微波加热至 ,将脱蜡 切片架上,放盒,中档或高档 10~15min,取出微波 ,自来 ,取出切片.因不同微波炉微波处理时间存在差异, 须自行调整.

三、直接高压抗原修复法 取修复液于不锈钢高压锅中加热至 ,将组织切片 ,修复 液然,盖上锅盖,待喷 1.5~2.5min即可脱离热源,自 ,取出切片.此方法适用于较难检测或核抗原的修复.