DOC《产品简介》

产品简介 Galaxybio 公司研发的活化HRP,对优质辣根过氧化物酶次序偶联,再活化,使辣根酶富含活性基团.

一经活化的HRP,极易和含氨基NH2的小分子或蛋白氨基NH2的共价结合.因此使用本方法标记物,具有标记率高、活性好、本底低及非常敏感等特点.敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍.A型液体包装,标记抗体的量比较随意,ng或ug级均可以.特别适合科研用的昂贵抗体的标记.也适合抗体抗原活性的检测. 一步标记,简便快速.与待记抗原或抗体混合后(约12个小时过夜标记或37℃0.5小时.) 可以微量标记,节省昂贵的抗原抗体. 无需透析,即时使用;

标记率极高,可大于95%;

敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍. 本试剂盒针对氨基进行标记,故只对含有氨基的分子.可以进行抗原或其他蛋白的标记.小分子的标记,如瘦肉精、DNA、多肽等等,标记时,如要提高HRP的利用率,可以加入过量的小分子,然后透析除去游离的小分子;

如果要即时使用,参考蛋白抗原的标记,减少小分子的用量,从而减少游离的小分子. 本底远远低于其它方法. 注意事项: 1. 抗原抗体如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris缓冲液中,需以PBS缓冲液充分透析,也可以超滤离心管进行超滤;

微量的含NH2 的小分子,会严重影响标记率. 2. 反应体系一般100μl~500ul /100ulHRP(相当于1mgHRP).体系太小,可能发生自身交联,造成本地升高;

体系太大会影响标记率. 3. REAGENT Ⅲ 终止液,封闭残余活化基团. 4. 注意反应 pH值约维持在9.5左右.pH值太低,多加反应启动剂. 5. 后续试验中,可采用本公司酶联稀释液,标准反应时间30分钟.当本底高时,以较高浓度蛋白溶液封闭的酶标板,同时把酶标稀释液的蛋白浓度加大.如果问题依旧存在,请联系我们技术咨询.

6 本试剂仅用于科学研究;

操作步骤: 以标记IgG抗体为例(反应体系按比例增减) 1. 取100ug抗体溶液(体积根据浓度计算),加入100ul(=1mg)REAGENT ⅠA型活化辣根氧化物酶. 总的反应体系控制在100μl~500ul/mg活化HRP左右,体系增大影响标记率,体积大时可以延长时间. 按照按mg活化HRP对应抗体100ug,抗原根据其分子量大小减少或增加.比如,抗原的分子量为30KD(为IgG的1/5),加入抗原的量为20ug抗原/50ulHRP.HRP:X的分子mol比保持在30:15~1左右. 2. 以REAGENTⅡ调pH值至9.5左右(大约10ul,因抗体用的缓冲液的差别,量有所不同,但确保PH在9.0以上,可以多加REAGENTⅡ,并准确记录REAGENTⅡ的使用量,以备下一步用). 37℃,0.5~1小时、或4℃过夜. 检测PH的方法:取一新管尖,吸取标记物溶液,然后排尽液体,拿管尖点在PH试纸上,比对即可. 3. (备选步骤)加入微量硼氢化钠.(适合酶标物长期放置的,即时使用无需添加.取200ul的枪头,插入硼氢化钠粉末,在管尖处有看得见白色粉末,再转移到酶标物物,吹打溶解混匀即可). 4. 加入REAGENTⅢ(约3倍体积的REAGENTⅡ).例如上一步用去REAGENTⅡ10ul,这一步加入REAGENTⅢ30~50ul.确保酶结合物PH在7.0左右,可以多加REAGENTⅢ调整),混匀终止反应. 5. (备选步骤,甘油能更好稳定酶结合物活性)加甘油至50%,-20℃保存. 特别提醒:后续试验中,酶标板条种类不同,本底差异特别大.当本底高时,标记时间宜采用30分钟标记,标记完后马上终止.以较高浓度蛋白溶液封闭的酶标板,同时把酶标稀释液的蛋白浓度加大,增加洗涤次数.如果问题依旧存在,请联系我们技术咨询. 推荐使用:包被了蛋白、或抗原、或抗体的酶标板的稳定,和稀释液的抗原或抗体的稳定,请购买本公司的相关产品.底物显色,本公司提供单组分TMB 和双组分TMB AB液,4~8℃可稳定数年;

单组份TMB底物液稳定敏感. 附带缓冲液清单: REAGENT Ⅰ活化辣根过氧化物酶 见包装 REAGENT Ⅱ反应启动剂 1.0ml(PH9.6) REAGENT Ⅲ 终止液 1.0ml(PH7.0) 说明书 1份 由于蛋白分子量,氨基酸种类有所不同,标记效果也有差别.如何寻找抗原抗体的最佳标记比例? 取几个离心管,每管加入上述重悬的活化HRP 5ul,分别加入不同体积的抗体溶液,比方1ul、2ul、4ul、8ul、

16、32ulul,然后各加入启动剂5ul,最后以水补充同一体积.37℃反应半小时. 通过ELISA方法检测抗体稀释度最大的管,即为最佳标比例. A型和B型活化HRP比较 包装 标记方法 标记率 产品保存 运输 A型500ul液体 相同 相同 4-8℃ 常温 B型1mgx5干粉 -20℃ 低温 Glue活化辣根过氧化物酶 (A 型,液体包装) 货号 规格 (HRP/支) 数量 (支) 标记抗体的量/ul (160KDIgG为标准) Cat:MD010A 5mg /500ul

1 1ulHRP约标记1ug~5ugIgG

2 Cat:MD020A 15mg /1500ul

1 1ulHRP约标记1ug~5ugIgG

5 10 贮存条件: 低温运输, 4℃贮存,禁止冻存.有效期一年. 生产日期:见包装