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《水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法(征求意见稿)》 编制说明 《水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法》 标准编制组 二一八年十月 附件

9 项目名称:水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法 项目统一编号:2015-9 承担单位:常州市环境监测中心 编制组主要成员: 薛银刚、 滕加泉、 徐东炯、 王倩、 余若祯、 陈桥、 施昕澜、汤佳峰、宗玉婷、潘晨环境标准研究所技术管理负责人:魏玉霞、陈艳卿 环境监测司项目负责人:李江i目录1项目背景.

1 1.1 任务来源.1 1.2 工作过程.1

2 标准制订的必要性分析.2 2.1 被测对象的环境危害.3 2.2 相关环保标准和环保工作的需要.3

3 国内外相关标准研究.5 3.1 主要国家、地区及国际组织相关分析方法研究

5 3.2 国内相关分析方法研究.7 3.3 与国内外相关标准的关系.8

4 标准制订的基本原则和技术路线.10 4.1 标准制订的基本原则.10 4.2 标准制订的技术路线.11

5 方法研究报告.13 5.1 方法研究的目标.13 5.2 术语和定义.13 5.3 方法原理.15 5.4 干扰和消除.16 5.5 试剂和材料.16 5.6 仪器和设备.23 5.8 分析步骤.29 5.9 结果计算与表示.34 5.10 质量保证和质量控制.35 5.11 实验室内验证.39

6 方法验证.41 6.1 方法验证方案.41 6.2 方法验证过程.42

7 与开题报告的差别说明.45

8 标准实施建议.45

9 参考文献.46 附 方法验证报告.48

1 《水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法》编制说明

1 项目背景 1.1 任务来源 2015年3月原环境保护部下发了《关于开展2015年度国家环境保护标准项目实施工作的 通知》(环办函〔2015〕329号),其中明确下达了《水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法》 的项目计划,项目统一编号为2015-9. 本标准制订的承担单位为常州市环境监测中心 (江苏省环境保护水环境生物监测重点实 验室),参加单位为中国环境科学研究院环境基准与风险评估国家重点实验室. 1.2 工作过程 1.2.1 成立标准编制组 2015年4月,接到本标准编制任务后,常州市环境监测中心成立标准方法编制组(以下 简称 编制组 ),成员以多年从事生物监测及环境科研工作的高级工程师和工程师为主. 1.2.2 查询国内外相关标准和文献资料 2015年4月~12月,编制组调研了国内外相关试验方法的研究进展,查阅了ISO国际标准 及其他国内外有关标准(包括OECD、ASTM等以及国内相关标准)和文献中关于此类试验 情况.按照该标准下达任务要求,本标准的技术内容主要参考《水质 废水对斑马鱼卵急性 毒性的测定》 (ISO 15088-2007) , 即 Water quality-Determination of the acute toxicity of waste water to zebrafish eggs (Danio rerio) ,同时参考了OECD 236测试指南 Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test ,将以上资料进行翻译. 1.2.3 开题论证,确定标准制订的技术路线 2016年1月,环境保护部科技标准司在北京组织召开本标准开题论证会,与会专家通过 质询、讨论,认为标准承担单位提供的材料齐全、内容详实完整;

对国内外相关标准及文献 进行了充分调研;

标准定位基本准确,主要内容及编制标准的技术路线较为合理、可行.同 时提出具体修改意见.论证意见主要有:明确方法的适用范围;

补充样品采样要求、样品的 前处理方法;

完善各环节的质量保证和质量控制要求;

明确两个毒性终点的表达方法;

以标 准参考毒物、 统一的生活污水和工业废水开展实验室间的方法验证. 编制组随后根据专家意 见对标准文本草案和编制说明进行了修改完善. 1.2.4 落实专家组意见,深入开展方法试验 2016年2月~2017年8月,根据开题论证意见,编制组按照《国家环境保护标准制修订工

2 作管理办法》 (国环规科技〔2017〕1号)、 《环境监测分析方法标准制修订技术导则》 (HJ 168-2010)、《国家环境污染物监测方法标准制修订工作暂行要求》(环科函〔2009〕10 号)和《环境保护标准编制出版技术指南》(HJ 565-2010)的要求深入开展试验研究,确 定了标准方法的试验条件及QA/QC的相关要求(如参比物质种类及浓度等).同时针对适 用范围做了大量的研究和验证工作. 1.2.5 组织方法验证工作 按照《环境监测分析方法标准制修订技术导则》(HJ 168-2010)的规定,2017年8月~ 11月, 编制组组织六家有资质实验室进行本方法的验证工作, 随后对数据进行汇总和整理分 析. 验证单位:中国环境科学研究院环境分析测试技术中心、中国环境监测总站、生态环境 部南京环境科学研究所、浙江省环境监测中心、浙江省农业科学院农产品质量标准研究所、 江苏国创环保科技有限公司. 1.2.6 编写标准征求意见稿和编制说明 2017年12月~2018年5月,根据实验研究结果、实验室间验证结果,在总结分析国内外 相关标准的基础上,编写完成《水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法》的标准文本征求意见 稿和编制说明初稿. 1.2.7 征求意见稿和编制说明专家研讨

2018 年5月底,召开《水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法》标准文本征求意见稿和 编制说明初稿的专家研讨会, 专家组建议进一步规范标准文本中的术语和定义、 试剂和材料、 样品采集方法的表述, 细化测试的试验步骤, 增加不同发育阶段和鱼卵测试效应判断示例图 的资料性附录;

编制说明中细化标准内容的确定依据;

按照 HJ

168 和HJ

565 进行标准文本 和编制说明的编辑性修改. 同时专家组对该标准适用范围也进行了讨论, 确认了本标准适用 于生活污水和工业废水的急性毒性测定.编制组根据专家组意见进行了修改完善. 1.2.8 征求意见稿和编制说明技术审查会

2018 年7月25 日,在北京正式召开本标准征求意见稿技术审查会,会议审查结论为通 过,同时形成如下修改意见:将适用范围改为 本标准适用于地表水、地下水、生活污水和 工业废水的急性毒性的测定 ;

编制说明中增加溶解氧对鱼卵孵化的影响;

标准文本中优化 受精卵的判定,进一步明确毒性测试终点,补充 LC50 的计算方法,完善质量保证和质量控 制的表述,增加斑马鱼及鱼卵的安全处置要求,编制组根据专家意见进行修改完善后,正式 提交本标准征求意见稿及编制说明.

2 标准制订的必要性分析

3 2.1 被测对象的环境危害 近年来, 随着我国工业化和城市化的加快, 城市生活污水和工业废水的排放总量和所含 各种污染物的成分也在迅速增加, 有些排放废水虽然常规理化指标达标, 但实际上仍可能含 有对人体健康具有危害的污染物, 这些污染物在水环境中的长期积累, 使得水体综合污染和 复合毒性的现象越来越突出. 尤其是许多有毒有害的微污染物, 如POPs 包括有机氯农药 (OCPs) 、 多环芳烃 (PAHs) 、 全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟辛酸铵(PFOA)以及消毒副产物等新型污染物在国内外城市 污水处理厂的排水中均有检出,虽然在环境中残留水平很低,对综合指标 BOD、COD 和TOC 等的贡献极小,这些环境毒性物质在较高浓度时可引起生物的急性毒性效应,在较低 浓度时往往还有其他生物危害作用. 如容易导致动物和人生育能力下降及其后代生存、 繁殖 能力减弱,造成两栖类等种群的衰退,甚至局域性灭绝,对生态环境和人类健康构成威胁. 近年来,国内外已有很多研究学者通过采用发光细菌、大型小⒂憷(斑马鱼、青、 稀有L鲫) 、藻类等各种测试生物研究发现不同排水具有较强的急性毒性效应.因而有必要 加强水质综合毒性监控和生态健康风险评价,对保证水体的生态环境安全具有重要的意义, 也是未来水质目标采用毒性指标管控和生物风险评估的重要依据. 2.2 相关环保标准和环保工作的需要 2.2.1 环境监管的迫切需求 目前, 我国污水排放的监督和管理主要采用物理化学监测方法, 根据理化指标进行评价、 计算污染物等标污染负荷及进行总量控制等.自1973 年我国第一个污染物排放标准《工业 三废 排放试行标准》 (GB J4―1973)发布以来,截至

2018 年,我国已有

67 项国家水污 染物排放标准, 包括

1 项污水综合排放标准和

60 多项行业水污染物排放标准. 经过

40 多年 的发展,我国水污染物排放标准中涉及的污染物控制项目不断丰富完善.目前,我国水污染 物排放标准控制污染物项目共

100 余项,基本满足当前水环境管理的需求.然而,这些标准 并不能反映废水排放后对生物的综合毒性. 考虑到在排放标准中应体现防范环境风险的理念, 保护人体健康和生........