PDF《氮芥、斑蝥素》

1 氮芥、斑蝥素

1 范围 本方法规定了测定化妆品中氮芥、斑蝥素的气相色谱-质谱测定法.

本方法适用于育发类化妆品中氮芥、斑蝥素含量的测定.

2 方法提要 以三氯甲烷提取育发类化妆品中的氮芥、斑蝥素等两种组分,用气相色谱-质谱联用仪 测定. 分别以氮芥、 斑蝥素特征离子定性, 以峰面积定量. 本方法中氮芥的检出限为 0.03ng, 定量下限为 0.10ng;

若取 0.5g 样品,其方法检出限为 0.3μg/g,最低定量浓度为 1μg/g.斑 蝥素的检出限为 0.05ng,定量下限为 0.15ng;

若取 0.5g 样品,其方法检出浓度为 0.5μg/g, 最低定量浓度为 1.5μg/g.

3 试剂和材料 除另有规定外, 本方法所用试剂均为分析纯或以上规格, 水为 GB/T

6682 规定的一级水. 3.1 氦气,纯度≥99.999%. 3.2 三氯甲烷:分析纯. 3.3 饱和氯化钠水溶液:称取

40 g 氯化钠,置于

250 mL 磨口锥形瓶中,加入 100mL 水,超声15 分钟,即得. 3.4 盐酸溶液(1mol/L): 取浓盐酸(ρ20=1.19g/mL)8.3mL,加水至100mL. 3.5 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取氢氧化钠4g,溶于水中,定容至100mL,混匀. 3.6 氮芥标准储备溶液[ρ(CH3N(CH2Cl)2=1mg/mL]:称取盐酸氮芥标准品[(CH3N(CH2Cl) 2・HCl]0.0123g(精确到 0.00001g)至10 mL 容量瓶中,用三氯甲烷定容至刻度,摇匀. 3.7 斑蝥素标准储备溶液[ρ (C10H12O4=1mg/mL]: 称取斑蝥素标准品 0.01g (精确到 0.00001g) 于10mL 容量瓶中,用三氯甲烷定容至刻度,摇匀.

4 仪器和设备 4.1 气相色谱-质谱联用仪,配EI 源. 4.2 分析天平. 4.3 涡旋混匀器.

2 4.4 离心机.

5 分析步骤 5.1 标准溶液制备 5.1.1 混合标准工作溶液[ρ=100μg/mL]:准确移取氮芥标准储备溶液(3.6),斑蝥素标准储 备溶液(3.7)各1.00 mL 至同一

10 mL 容量瓶中,用三氯甲烷定容至刻度,摇匀. 5.1.2 标准系列溶液:分别准确移取混合标准工作溶液(5.1.1)0.05 mL,0.10mL,0.25 mL, 0.50mL,1.00mL 至10mL 容量瓶中,用三氯甲烷定容至刻度,摇匀. 5.2 样品预处理 称取样品 0.5g(精确到 0.001 g)于10mL 离心管中,加饱和氯化钠水溶液 2.0mL,涡旋 30s,用盐酸溶液(3.4)或氢氧化钠溶液(3.5)将样品溶液调至中性,精密加入三氯甲烷 5mL,涡旋混匀 2min,5000rpm 离心 3min,取下层有机相,经0.45 μm 微孔滤膜过滤后, 滤液作为待测溶液,备用. 5.3 参考色谱-质谱条件 色谱柱:5%苯基-甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(DB-5MS,30 m*0.25mm*0.25 μm), 或选用同等极性的弹性石英毛细管柱. 色谱柱温度:50℃保持 1min,然后以每分钟 15℃升温至 150℃,保持 5min,然后以每 分钟 30℃升温至 230℃保持 1min. 进样口温度:230℃;

色谱-质谱接口温度:230℃;

载气:氦气,纯度≥99.999%(3.1),流速 1.0mL/min;

电离方式:EI;

电离能量:70eV;

测定方式:选择离子检测(SIM),氮芥定性离子(m/z):106(100.0)、63(25.2)、 120(4.8),定量离子(m/z):106;

斑蝥素定性离子(m/z):128(100)、96(87.6)、 70(20.6),定量离子(m/z):128. 进样量:1μL 进样方式:分流进样,分流比 10:1;

溶剂延迟:5min 5.4 测定

3 5.4.1 定性判定 用气相色谱-质谱法对样品进行定性判定.在相同试验条件下,样品中应呈现定性离子 对的色谱峰, 被测物质的特征离子峰保留时间与标准溶液对应的保留时间一致, 且样品所选 择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的监测离子对相对丰度比的偏差不超过 表5.4 规定范围,则可以判定样品中存在氮芥或斑蝥素. 表5.4 定性测定时离子相对丰度的最大允许偏差 相对离子丰度(k) k≥50%

50 %>

k ≥

20 %

20 %>

k ≥

10 % k≤

10 % 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 5.4.2 定量 在 5.3 分析条件下,依次将系列浓度标准溶液分别进样,绘制峰面积-浓度校准曲线, 其线性相关系数应大于 0.99.取 5.2 样品待测溶液进样,将氮芥或斑蝥素的色谱峰面积 代入标准曲线,按

6 项下公式计算,得出样品中氮芥或斑蝥素的含量.

6 分析结果的表述 6.1 计算 样品结果计算: 式中: ――样品中氮芥、斑蝥素的含量,μg/g;

m――样品取样量,g;

――代入校准曲线计算得到的样品待测液中斑蝥素或氮芥的质量浓度,μg/mL;

V――样品定容体积,本方法为 5mL. 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%. 6.2 回收率和精密度 本方法对育发类化妆品中氮芥、斑蝥素加标回收率分别在 80.0%-120.0%之间,精密度分 别在 10%之内.

7 图谱

4 图1氮芥、斑蝥素的总离子流色谱图 图2氮芥的质谱图 图3斑蝥素的质谱图

5 氮芥、斑蝥素检测方法修订说明 为进一步完善化妆品安全技术法规体系, 中国食品药品检定研究院组织开展了 化妆品 中氮芥、斑蝥素的检测方法 修订工作.现已对原方法进行了修订,完成了新方法建立和验 证工作,就修订和起草工作有关情况说明如下:

1 修订和起草的必要性 氮芥是最早用于临床并取得突出疗效的抗肿瘤药物, 是一种高度活跃的化合物, 并且是 一种强起疱剂和局部刺激剂,能刺激皮肤毛发的生长,但它是一种高毒性物质,若盐酸氮芥 水溶液滴到皮肤上迅速透皮吸收, 会引起大疱红肿疼痛甚至组织坏死溃疡, 严重的可以通过 呼吸道吸收引起气道水肿和肺水肿.我国对化妆品中的氮芥使用有严格限制, 《化妆品卫生 规范》2007 版规定氮芥为禁用物质,并且规定了氮芥检测方法.但该方法样品处理步骤比 较繁琐,酸化除杂、碱性提取,再进行气相色谱测定,这些步骤可能对目标物的损耗大,造 成结果不准确. 斑蝥素外用对皮肤有止痒改善局部神经营养及刺激毛根、 促进毛发生长作用, 但是毒性较大,《化妆品卫生规范》(2007 年版)将斑蝥素作为限用物质仅可用于育(生) 发剂中,在化妆品中最大允许使用浓度 1%,且在儿童产品中禁用,并收载了气相色谱测定 方法.《化妆品安全技术规范》(2015 年版)已将之列为禁用组分.但原有方法存在着很 多缺点:两个组分分开测定,很不方便;

三氯甲烷提取到的杂质较多,尤其是中药提取物中 的生物碱成分多,严重干扰测定,常导致气相色谱法测定的干扰峰很多;

对疑似阳性样缺乏 确证手段. 针对原方法的缺点,本方法拟对上述两种物质的原方法进行改进,统一建立气相色谱- 质谱法(GC/MS)作为氮芥、斑蝥素的定性(确证)方法和定量方法.

2 修订和起草依据及文献 (1)《化妆品卫生规范》(2007 年版). (2)《关于印发化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范的通知》(国食 药监许[2010]455 号) (3)孙艳平,李涛,宋辉,固相萃取-气相色谱法测定擦癣药水中斑蝥素的含量,《中 药新药与临床药理》,2010 年7月第

21 卷第

4 期(4)黄水兰,李超华,唐满姣,祛膜止血乳膏中斑蝥素的含量测定,《民营科技》,

2012 年第

4 期6(5)许勇, 苗水,郏征伟等,GC-MS 法检测化妆品中禁用物质氮芥的含量,中国卫生 检验杂志,2012 年11 期(6)陆军,庞燕军,赵晓东等,化妆品中氮芥测定方法的探讨,........