PDF《色谱柱的清洗方法》

80 色谱柱的清洗方法 可通过色谱柱的清洗来解决峰型变化、 洗脱时间变化或柱压升高等问题.

本节描述了色谱柱柱效下降的典型现象和柱子的清洗方法. 更详细的清洗方法, 请参阅相应的使用说明书. 反相色谱柱 糖分析用柱 水溶性SEC(GFC)色谱柱 离子交换色谱柱 (离子色谱柱) 疏水性色谱柱 一般情况下, 建议冲洗液的体积为柱体积的5~10倍. 冲洗时应避免压力升高. 严重污染的柱子有可能不能完全恢复其柱效. 用甲醇、 乙腈、 THF等有机溶剂浓度较高的洗脱液清洗. (分析时使用过缓冲盐水溶液的情况下, 请注意与有机溶剂的混合可能会导致盐的析出. ) 离子性物质吸附时………用盐浓度较高的溶液或pH值不同于洗脱液的溶液清洗. 疏水性物质吸附时………用添加了有机溶剂的流动相清洗. (分析时使用过缓冲盐水溶液的情况下, 请注意与有机溶剂的混合可能会导致盐的析出. ) [配位体交换柱 SUGAR系列] 抗衡离子流失时…用含相同抗衡离子的盐溶液清洗或从进样阀注入数次. [聚合物基质氨基柱 NH2P系列] 氨基酸化时………水→0.1M高氯酸水溶液→水→0.1M NaOH水溶液→水→洗脱液的顺序清洗. 离子性物质吸附时………用盐浓度较高的或pH值不同的洗脱液清洗. 疏水性物质吸附时………用添加了有机溶剂的流动相清洗. (分析时使用过缓冲盐水溶液的情况下, 请注意与有机溶剂的混合可能会导致盐的析出. ) 蛋白质吸附时………1~2mL的0.1M NaOH水溶液或30%醋酸水溶液从进样阀注入数次 蛋白质吸附时………1~2mL的0.1M NaOH水溶液或30%醋酸水溶液从进样阀注入数次 1. 色谱柱压力升高 2. 峰形异常 (宽峰、 前延或拖尾) 、 裂缝 3. 保留时间改变 4. 基线不稳定 为了达到有效清洗的目的, 请反向连接柱子, 流量降至通常流量的三分之一以下. 色谱柱劣化 (污染) 的典型现象 此时 ・ ・ ・ 对于吸附物 (污染物) 溶解性好的溶剂 对于该色谱柱洗脱力强的溶剂 选择清洗液的注意事项 主要的清洗方法 请使用说明书规定的溶剂清洗. 柱头筛板堵塞会导致柱压升高. 在这种情况下, 请反向连接柱子, 流量降至通常流量的三分之一以下. 堵塞物洗出后压力会降低.