PDF《中；扬赫O》

z x SW x O 寸扫赫实验教学材料 用具进行灭 菌外 还可采取如下措施 :(l ) 接种 时进行严格的无菌操作 整个过程应该在超净工作 台上进行 ,如果学校没有超净工作 台,教师可尝试在普 通实验台上点燃两个酒精灯创设无菌环境(见图 1) 为了保证培养的效果还可 以在酵母菌培养液 中添加 适量的青霉素以抑制细菌的繁殖 (2 ) 计数时采取 单次取样的策略 对 同一培养液进行重复计数 ,很容 易造成杂菌的污染 , 导致实验结果不准确 ,如果单次 取样 ,就可以解决这一问题 例如 ,实验周期为

7 天, 则需配制

2 1 份(3 个重复)相同的培养基 (见表 1, 深 色标注为当天计数试管 ),每天对其中的

3 个计数 ,计 数后的培养液不再继续培养 细胞也计入 总数 , 导致实验 数据大 于实 际数 量因此,酵母菌经染色后计数获得的数据更为准确 死细胞 ( 蓝色 ) 活细胞 (无色)图24几个需要注意的细节 接种前一定要把酵母 菌母 液摇匀 (由于重力作 用, 酵母菌在母液中会发生沉淀) , 否则可能会导致不 同培养组 中酵母菌的数量 出现较大的差异 使用血球计数板计数时,应该先盖上盖玻片,再向 计数室添加培养液 如果顺序反过来 ,会 出现如图

3 中由于液体表面张力的作用 ,使盖玻片不能与计数板 紧密结合, 导致计数室的体积大于 0.1 ~

3 另外, 在 使用血球计数板之前一定要保证计数板 的清洁 ,因为 很小的污物也会导致计数室体积发生巨大的变化 表1时时间 间 试管编号 号lllllll2

2 2立14445

5 56

6 67

7 78

8 89

9 9l

0 0 0l l l l l

2 2

2 1

3 3 3l

4 4 4l

5 5 5l

6 6 6l

7 7 7l

8 8 8l

9 9 9为为2lll第第1天天...黝黝毕毕...................................第第2天 天天天天天天哪哪哪哪哪哪哪哪哪哪哪哪哪哪哪第第3天 天天天天天天天天天暇暇暇暇暇暇暇暇暇暇暇暇第第4天 天天天天天天天天天天天天IIIIIIIIIIIIIIIII第第5天 天天天天天天天天天天天天天天天lllllllllll第第6 天天天天天天天天天天天天天天天天天天天天天第第7天天天天天天天天天天天天天天天天天天天,诬 盖玻 片 培养液 计数室 l 一盆枷.一

1 图3在染色时一定要先把染液和待测酵母 培养 液按 比例混匀 由于染液会导致酵母菌培养液被稀释, 因 此酵母菌的实际数量应该是实际计数数量乘 以最终 稀释倍数 谨记不要 在计数 板上进行染色 如果 在 计数板上染色 , 由于无法获知计数室中染液和酵母培 养液的混合 比例(见图

4 ) , 因此 , 计数者无法得到准 确的酵母菌数量

3 计数难度大 由于高 中学生第一 次进行微生物计数 , 因此,很 难保证计数的准确性 为了保证计数的准确性 ,笔者 采取了如下措施 :(

1 ) 开放实验室 ,学生在计数前 可 以根据 自己的时间随时去实验室练习血球计数板的 使用 , 以保证计数的准确性 (2 ) 在实验设计时应设 置多个重复组(建议

3 组一10组) ,在计算结果时取 各组的平均值 (3 )用亚 甲基 蓝染 色的方法来 区分 死细胞和活细胞 由于死 细胞 的细胞膜失去选 择透 过性 ,所以能被亚 甲基蓝染成蓝色 , 而活细胞则保持 原来的颜色(见图

2 ) 如果未经染色计数 ,就会把死 图4以上是笔者在进行本实验 时发 现的问题和采取 的对策 , 在实际教学 中取得 了一定 的效果 , 希望对各 位老师有些许 的帮助 全驰卜印://例喇例.z x s w j X.c o m