PDF《牛病毒性腹泻病毒 HB-bd毒株 E2基因的 克隆表达及免疫原性...》

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0 1 5年01月( 上) 收稿日期:

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2 2 ;

修回日期:

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2 6 基金项目: 国家 十一五 科技支撑计划项目(

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0 6 B A D

0 4 A

1 0 -

4 ) ;

河北省现代农业产业技术体系奶牛产业创新团队建设 项目 作者简介: 吉星煜(

1 9

9 0- ) , 男, 硕士研究生, 研究方向为动物 疾病防治技术,

5 6

9 4

7 5

2 0

3 @q q .

c o m . 通信作者: 秦建华(

1 9

6 4-) , 男, 教授, 博士, 研究方向为动物 疫病防控技术, q j h q q q @1

2 6 . c o m ;

赵月兰(

1 9

6 3-) , 女, 教授, 博士, 研究方向为动物疾病防治技术, y u e l a n z h a o @1

6 3 . c o m . 牛病毒性腹泻病毒 H B-b d 毒株 E 2基因的 克隆表达及免疫原性分析 吉星煜1 , 张晶1 , 张月1 , 常丽云2 , 左玉柱1 , 秦建华1 , 赵月兰1 (

1 . 河北农业大学 动物医学院, 河北 保定

0 7

1 0

0 1 ;

2 . 河北农业大学 动物科技学院, 河北 保定

0 7

1 0

0 1 ) 中图分类号: G

7 8

5 ;

S

8 5

2 .

6 5 +

3 文献标识码: A 文章编号:

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0 4-

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3 4 (

2 0

1 5 )

0 1-

0 1

2 3-

0 5 关键词: 牛病毒性腹泻病毒( B V D V ) ;

E 2基因;

克隆;

p E T

2 0 b 载体;

原核表达;

免疫原性 摘要: 为了研究牛病毒性腹泻病毒 E 2蛋白的免疫原性, 试验采用 P C R技术扩增牛病毒性腹泻病毒 H B- b d 毒株去除跨膜区的 E 2基因, 将获得的 s E 2基因克隆到 p E T

2 0 b载体构建重组质粒 p E T

2 0 b- s E

2 , 并转化大肠杆菌 B L-

2 1 ( D E

3 )感受态细胞及诱导表达, 应用 S D S- P A G E 、 We s t e r n- b l o t 和Dot-ELISA对表达产物进行分析, 取纯化的表达产物加等量佐剂免疫家兔, 观察免疫效果.结果表明: s E 2基因得到了高效表达, 表达的重组蛋白分子质量约为

3 7 . 0k u , 表达产物能诱导免疫家兔产生高 效价抗 B V D V抗体.说明表达产物 s E 2蛋白具有良好的免疫原性. C l o n i n ga n de x p r e s s i o no f t h eE 2g e n eo f t h eHB- b ds t r a i no f b o v i n ev i r a l d i a r r h o e av i r u s a n di mmu n o g e n i c i t ya n a l y s i s o f t h eE 2p r o t e i n J I X i n g - y u

1 , Z H A N GJ i n g

1 , Z H A N GY u e

1 , C H A N GL i - y u n

2 , Z U OY u - z h u

1 , Q I NJ i a n - h u a

1 , Z H A OY u e - l a n

1 (

1 . C o l l e g e o f V e t e r i n a r yM e d i c i n e , A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y o f H e b e i , B a o d i n g

0 7

1 0

0 1 , C h i n a ;

2 . C o l l e g eo f A n i m a l S c i e n c ea n dT e c h n o l o g y , A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y o f H e b e i , B a o d i n g

0 7

1 0

0 1 , C h i n a ) K e yw o r d s : b o v i n ev i r a l d i a r r h e av i r u s ( B V D V ) ;

E 2g e n e ;

c l o n i n g ;

p E T

2 0 bv e c t o r ;

p r o k a r y o t i ce x p r e s s i o n ;

i m m u n o g e n i c i t y A b s t r a c t : T o s t u d y t h ei m m u n o g e n i c i t yo f t h e E 2p r o t e i no f b o v i n ev i r a l d i a r r h e av i r u s ( B V D V ) ,t h e p o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n( P C R )t e c h n i q u e w a s u s e dt o a m p l i f y t h e E 2g e n e r e m o v e dC- t e r m i n a l t r a n s m e r n b r a n e d o m a i no f t h e H B- b ds t r a i no f B V D V . T h e o b t a i n e ds E 2g e n e w a s c l o n e di n t o t h ee x p r e s s i o nv e c t o r p E T

2 0 bt o c o n s t r u c t a r e c o m b i n a n t p l a m i dp E T