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2 ml,37℃、5%CO2 培养箱中培养. 注意:细胞密度为该试剂盒的标准密度,若修改细胞接种密度则需要考虑实验结果的稳 定性.或根据所检测 MSC 正常传代的密度接种,过夜培养后添加诱导培养完全培养基. 3. 当细胞融合达 90%时, 弃去培养上清, 每孔添加诱导液 B

2 ml/孔, 37℃、 5%CO2 培养. 注意:成脂诱导后细胞易脱壁,换液时完全培养基必须经室温复温

30 分钟.添加培养 基时动作要轻柔,沿培养器皿侧壁缓缓加入,避免吹起细胞.细胞起始诱导融合度对诱 导效果十分关键,必须确保细胞生长至足够密时再进行诱导. 4. 诱导培养

72 h 后弃去原培养上清,添加诱导液 C

2 ml/孔,37℃、5%CO2 继续 培养.

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邮箱:[email protected] 5. 继续诱导培养

24 h 后弃去原培养基,添加诱导液 B

2 ml/孔,37℃、5%CO2 继 续培养. 6. 重复步骤

4、5 约3-5 次,待细胞内出现明显脂滴时更换为诱导液 C 继续培 养. 7. 每2天更换新鲜诱导液 C,继续培养至脂滴足够大时培养结束. 注意:换液时诱导液必须经过复温,否则影响诱导效果和可能导致细胞脱壁.根据实验 需要选择培养结束时间,若成脂面积过大或脂滴过大导致连成片则不利于结果的呈现, 建议提前终止. 不同实验室 MSC 诱导时出现脂滴的时间不尽相同, 若大面积出现脂滴较 早,则可提前更换为诱导液 C. 8. 诱导培养结束时,弃去培养上清,DPBS 洗细胞两次,4%中性多聚甲醛溶液

2 ml/孔室温固定细胞

20 分钟. 注意:培养结束时或中途可以选择其他检测方法,如基因表达检测等,若采用自己的检 测方法则后续方案需要自己拟定. 9. 弃去固定液,DPBS 洗2次,加入油红 O 染液

1 ml/孔染色

15 分钟. 注意:该步骤适用于鉴定成脂能力,若出现脂滴(脂肪细胞)则会呈现红色着色.若需 要得到美观的图片,则染色时间需自己掌握. 10. 弃去油红 O 染液,DPBS 洗3次. 11. 显微镜下观察并拍照. 12. 结果判定:按照程序操作完毕,低倍镜下观察可见大面积红色着色点,20 倍和40 倍镜下可观察到红色球形在细胞内的情况,此红色着色球为脂滴,说明 实验所用的 MSC 具有成脂能力.否则,所使用的 MSC 无成脂能力. 注意:该判定标准仅进行定性分析,若需要进行定量分析,需要自己制定方案. 结果展示

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